响应面法优化槐米中芦丁的溶剂热法提取工艺（一）

芦丁（Rutin），面法又名芸香苷，优化属于多羟基黄酮类化合物，槐米具备抗炎、中芦抗病毒、溶剂热法抗肿瘤、工艺降血脂等多种药理浸染，面法在临床上主要用于治疗高血压、优化糖尿病、槐米血汗管疾病等多种疾病。中芦此外，溶剂热法芦丁还作为质料被运用于医药、工艺保健品以及化装品格业，面法是优化一种极具开辟后劲的人造活性物资。芦丁宽泛存在于槐米、槐米桑叶、苦荞麦、小蓟等动物中，其中槐米中的含量较为充实，是工业提取芦丁的主要质料。

槐米（Flossophorae），豆科动物槐树（SophorajaponicaL.）的去世板花蕾及花。在中医临床上作为止血剂，用来治疗痔疮、子宫出血，并有清肝泻火、治疗肝热目赤的成果。当初从槐米中提取芦丁的方式主要有碱溶酸沉法、醇回流法、微波法以及超声法，但这些提取方式存在未必的缺少之处，如碱提酸沉法提取率低；醇回流法提取光阴长；微波法以及超声法运用的超声发生器以及微波仪价格高尚，提取老本较高。因此，探寻一种新的功能、快捷、不便的提取方式就显患上尤为紧张。

溶剂热法是纳米资料以及功能资料分解的罕用方式，其主要道理因此有机物或者有机物的水溶液为反映溶剂，经由调控反映温度，使密闭系统内的压力着落，从而使患上溶剂在高于个别溶剂沸点温度的状态下仍连结液体状态，但其物理化学性子，如，外表张力、极性、氢键等发生改动，进而普及反映速率以及产物提取率。当初尚未见运用溶剂热法提取芦丁的文献报道，因此本试验对于该提取方式妨碍了钻研，并接管响应面法对于该法妨碍了优选，以期为芦丁的提取提供一种新方式，同时也为槐米的深度开辟提供参考。

一、资料与方式

一、资料与仪器

槐米（洛阳中药材市场，破碎捣毁过80目筛，备用）；冰乙酸（合成纯），天津市科密西化学试剂有限公司；芦丁比力品，大连美仑生物技术有限公司；甲醇、乙腈、磷酸均为色谱纯，天津市科密西化学试剂有限公司；水为超纯水。天美LC2000液相色谱仪，上海天美迷信仪器有限公司；CT14RD高速离神思，上海天美生化仪器配置装备部署有限公司；BT125D双量程电子合终日平，德国多利斯公司；聚四氟乙烯内衬的不锈钢反映釜，福建物资结构钻研所；PHG9246A电热恒温鼓风去世板箱，上海精宏试验配置装备部署有限公司。

二、试验方式

（1）色谱条件

色谱柱：KromasilC18柱子（250×4.6妹妹，5μm），行动相：甲醇-水-冰乙酸（46∶52∶2，v/v）；流速：1mL/min；检测波长：360nm；进样量：20μL；柱温：室温。

（2）芦丁规范曲线的绘制

详尽称取芦丁比力品10.0mg，50%甲醇溶液定容于200mL容量瓶中，移取芦丁比力品溶液5mL、10mL、15mL、20mL、25mL分说置于100mL容量瓶中，50%甲醇定容。遵照色谱柱：KromasilC18柱子（250×4.6妹妹，5μm），行动相：甲醇-水-冰乙酸（46∶52∶2，v/v）；流速：1mL/min；检测波长：360nm；进样量：20μL；柱温：室温色谱条件进样，接管峰面积外标法绘制芦丁浓度（X）与峰面积（Y）的回归方程。

（3）单因素试验

称取槐米0.20g，置于25mL聚四氟乙烯内衬的不锈钢反映釜中，退出未必浓度的乙醇溶剂，在设定的条件下（审核乙醇浓度、提取光阴、提取温度、液料比）妨碍提取。提取结束后，人造冷却至室温。移取2.0mL提取液以8，000r/min离心3min，取上清液0.5mL于100mL容量瓶中，50%甲醇定容，摇匀，过0.45μm滤膜，取续滤液作为供试液。检测芦丁含量，按下式合计样品中芦丁的提取率Y。

芦丁提取率Y（%）=C×V×n/10⁴M；

式中C为提取液中芦丁浓度（μg/mL），V为提取溶剂的体积（mL），n为稀释倍数，M为槐米品质（g）。

（4）响应面试验妄想

在单因素试验根基上，依据Design-Expert8.0.6.1软件中的CentralComposite妄想道理，选乙醇浓度（A）、提取光阴（B）、提取温度（C）以及液料比（D）为4个审核因素，芦丁提取率（Y）为响应值，妨碍四因素五水平的试验妄想，以判断槐米中芦丁最佳提取工艺条件。因素水平表见表1。

二、服从与合成

一、芦丁含量的测定

图1是芦丁规范品以及样品的功能液相谱图。从图中可能看出，在以上色谱条件下，芦丁峰形对于称，可用于溶液中芦丁含量的测定。同时，以峰面积为纵坐标（Y），芦丁浓度为横坐标（X），患上到芦丁的规范曲线方程为：Y=32120X-12042，R²=0.9993。芦丁浓度在2.5～12.5μg/mL畛域内线性关连优异。

二、单因素试验合成

（1）乙醇浓度

称取0.20g的槐米粉末5份，分说退出水、25%乙醇、50%乙醇、75%乙醇以及乙醇16mL于聚四氟乙烯的反映釜内，90℃提取30min，服从见图2。从图中可能看出，乙醇浓度低于50%时，随着乙醇浓度的着落，芦丁提取率随之着落。原因可能是因为乙醇的浸透能耐较强，削减乙醇浓度普及了芦丁在提取溶剂与细胞基质之间的消融失调，以是乙醇浓度着落有利于芦丁的提取。但芦丁的极性较大，不断普及乙醇浓度，溶剂的极性变小，依据相似相溶道理，芦丁的消融度会随之变小，因此芦丁的提取率着落。因此，抉择乙醇溶度为50%较为适量。

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