液相色谱内标法测定婴幼儿配方食物中色氨酸含量（一）

以α-甲基-色氨酸为内标物，液相幼儿建树了碱水解-功能液相色谱法测定婴幼儿配方乳粉及非凡医学用途婴儿配方食物中色氨酸含量的色谱食物方式。样品经碱溶液水解，内标C18柱别离，法测荧光检测器检测；内标法定量，定婴校对于水解历程色氨酸的配方损失，着落基质之间的中色差距，普及定量服从的氨酸精确性；在罕有样品含量水平加标，样品的含量接管率为92.5%~97.4%之间，相对于规范偏差<3.11%，液相幼儿试验室间偏差＜6.7%。色谱食物方式操作重大、内标精确度高，法测重复性好，定婴适用于婴幼儿配方乳粉及非凡医学用途婴儿配方食物中色氨酸的配方精判断性定量。

色氨酸是人体的必须氨基酸之一，退出机体卵白质的分解以及代谢调节，它是烟酸、5-羟色胺、褪黑激素等生物活性物资的前体物，影响卵白质、糖类以及脂肪等营养物资的代谢。当人体缺少色氨酸时会引起皮肤疾患、玻璃体进化及心肌纤维化等症状。相较于成人，婴幼儿时期愿望发育迅速，在该时期色氨酸及其代谢物对于大脑的发育以及对于进食-饱足、就寝-醒觉纪律等神经行动调节发展至关紧张，因此必须保障婴儿食物中营养素的含量以及品质。对于消化罗致拦阻、代谢凌乱或者特定疾病状态的儿童对于营养素或者伙食有加倍非凡的需要。

婴幼儿配方乳粉以及非凡医学用途婴儿配方食物作为特定人群的食物源头，其营养成份组成在国家规范中都有非凡规定，对于色氨酸的含量以及削减方式都有相干的要求，但缺少响应的检测方式则范。当初，测定色氨酸的检测方式有包罗分光光度法、电化学法、氨基酸合成仪法、功能液相色谱法、液相色谱串联质谱法以及离子色谱法等，液相色谱方式的特同性以及定量精确性均有劣势。色氨酸多以卵白质的方式存在于样品中，需水解为游离态后能耐测定。当初个别接管的碱水解方式长期在高温、高浓度碱液条件下妨碍，色氨酸有未必损失，且在差此外基质中色氨酸的损失水平不残缺不同。

本钻研在典型碱水解方式的根基上引入结构与色氨酸相似的内标物α-甲基色氨酸，之内标法定量，使对于立水解条件同时适用于婴幼儿配方乳粉以及非凡医学配方婴幼儿配方食物（乳卵白全副水解配方、乳卵白深度水解配方以及氨基酸配方）中色氨酸含量的精确测定。

1资料与方式

1.1 资料与试剂

色氨酸规范品（C11H12N2O2，CAS号：73-22-3，纯度：99.7%），德国Dr.Ehrenstorfer公司；α-甲基-色氨酸规范品（C12H14N2O2，CAS号：110117-83-4，纯度：98%），上海甄准生物科技有限公司；甲醇(色谱纯)，美国Merck公司；醋酸铵（色谱纯），美国Fisher Chemical公司；乙酸（色谱纯），Fisher Chemical公司色；氢氧化锂（合成纯），国药总体化学试剂有限公司；盐酸（合成纯），国药总体化学试剂有限公司；聚四氟乙烯材质水解管，带螺纹口外盖，内衬聚四氟乙烯密封垫；水相微孔滤膜（0.22 μm，上海安谱）；NIST配方乳粉质控样1849a（（184±10）mg/100g, k=2）、NIST配方乳粉质控样1869（（228±24）mg/100g, k=2）、婴幼儿配方乳粉以及非凡医学配方婴幼儿食物（乳卵白全副水解配方、乳卵白深度水解配方以及氨基酸配方），均为市售。试验室用水适宜 GB /T 6682 规定的一级水要求。

1.2规范溶液配制

色氨酸规范溶液（100 μg/mL）：精确称取10.0 mg色氨酸规范品用水消融后定容至100 mL；内标使命液（1 mg/mL）：称取10 mg α-甲基-色氨酸规范品用水消融后定容至10 mL。

1.3仪器与配置装备部署

Thermo Ultimate 3000功能液相色谱仪配有荧光检测器，美国Thermo Fisher公司；KQ-800DE超声洗涤仪，宁波新芝生物科技股份有限公司；MS204TS电子天平，瑞士梅特勒公司；DHG-9243BS-Ⅲ电热去世板箱，上海新苗医疗工具制作有限公司；MS 3 basic涡旋搅浑器，德国IKA公司；IQ 7000超纯水仪；美国 Millipore 公司。

1.4样品前解决

精确称取搅浑平均的固体试样200 mg（精确到1 mg）于配有密封垫的具塞螺纹口聚四氟乙烯离心管中，挨次退出0.5 mL内标使命液、5 mL氢氧化锂溶液（4 mol/L），涡旋混匀后于超声波振荡器中震撼5 min，保障样品残缺消融后，置于110 ℃烘箱中水解20 h。掏出水解管，待冷却至室温后，用盐酸溶液（4 mol/L）调pH值至3~8，将水解液全副转移至50 mL容量瓶中并用水定容，混匀后经0.22 μm水相微孔滤膜过滤备用。

1.5仪器条件

色谱柱：Xbridge C18(3.5 μm, 150 妹妹×4.6 妹妹)；行动相：A为乙酸铵溶液（10 妹妹ol/L，pH =4.0），B为甲醇，梯度洗脱，洗脱挨次见表1；柱温：35 ℃；进样体积：5 μL；荧光检测器激发波长280 nm，发射波长346 nm。梯度洗脱挨次见表1，每一次进样前初始行动比照例失调5 min。

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