补骨脂的化学成份钻研（一）

指标 钻研补骨脂（PsoraleacorylifoliaL.）的补骨化学成份。方式 运用硅胶柱色谱，脂的钻研MCI柱色谱，化学ODS柱色谱以及功能液相色谱中别离伎俩，成份对于补骨脂的补骨95%乙醇提取物妨碍化学成份钻研，并经由质谱以及核磁共振等波谱数据对于别离患上到的脂的钻研化合物妨碍结构判断。服从 从补骨脂的化学95%乙醇提取物中别离判断10个化合物，它们分说是成份seputhecarpanA（1）、补骨脂酚（2）、补骨13-羟基异补骨脂酚（3）、脂的钻研12-羟基异补骨脂酚（4）、化学二聚补骨脂酚A（5）、成份二聚补骨脂酚B（6）、补骨二聚补骨脂酚C（7）、脂的钻研4,化学2′-二羟基-4′-甲氧基-5′-（3′′,3′′-二甲基烯丙基）-查尔酮（8）、isobavachromene（9）、4-hydroxyisolonchocarpin（10）。论断 其中化合物1初次从该动物中别离患上到。经由卵白质酪氨酸磷酸酶1B (PTP1B)酶抑制活性试验评估了化合物的活性，服从呈现化合物2以及7具备PTP1B酶的抑制活性。

补骨脂（Psoralea corylifolia L.）又名：破故纸、婆固脂等，是豆科补骨脂属动物补骨脂的去世板成熟果实，主要产于云南西双版纳以及四川金沙江流域，具备补肾壮阳、温脾止泻、纳气平喘的成果，临床用于白癜风以及骨质涣散等疾病的治疗。补骨脂的主要化学成份是单萜酚、单萜酚二聚体、单萜酚与黄酮，查尔酮、香豆素以及异黄酮的异二聚体、黄酮、香豆素以及脂肪酸等。补骨脂提取物及从中别离患上到的单体化合物具备多种药理活性，包罗雌激素活性、抗肿瘤活性、抗氧化活性、抗菌活性、抗炎活性、抗烦闷活性、肝呵护活性、成骨细胞活性以及抗糖尿病浸染等，具备很好的药用价格。近些年来在抗糖尿病的钻研中，卵白质酪氨酸磷酸酶1B（protein tyrosine phosphatase 1B，PTP1B酶）可能调节良多与糖尿病紧张靶点相干的细胞应答，对于胰岛素信号转导妨碍负调节，是抗糖尿病钻研的热门之一。课题组前期钻研发现多种人造酚类成份对于PTP1B酶有优异的抑制活性，因此本钻研对于补骨脂的酚类成份睁开钻研，并经由PTP1B酶的抑制活性筛选活性化合物，为补骨脂的抗糖尿病钻研提供物资根基。运用多种色谱别离伎俩从补骨脂的95%乙醇提取物中患上到了10个酚类化合物（图1），其中化合物1为初次从该动物中别离患上到。并对于化合物妨碍了体外PTP1B酶的抑制活性测试，服从呈现，化合物2以及7呈现出PTP1B酶抑制作用。

1 仪器与资料

核磁共振光谱（NMR）是在BrukerAV-ш400、BrukerAV-ш500、VNS-600、Bruker AV-600光谱仪上，以TMS作为内标，在氘代氯仿（CDCl3）中运行的。高分说质谱（HRESIMS）数据记着实Agilent 1100系列LC/MSD离子阱质谱仪上。将Agilent 1100与ODS-C18色谱柱（YMC）或者苯基柱（YMC-Pack Ph）散漫运用妨碍HPLC合成试验。运用带有两个泵（C-605），紫内线检测器（C-635）以及ODS色谱柱（60×600 妹妹，50 μm，400 g；YMC）的Büchi系统妨碍MPLC试验。在具备UV检测器（SPD-16）以及ODS-C18色谱柱（YMC）或者苯基柱（YMC-Pack Ph）的Shimadzu LC-16P仪器上妨碍制备型HPLC别离试验。硅胶（100-200目，200-300目，青岛青岛陆地化学有限公司），ODS（50 μm，YMC，日本）以及MCI（CHP 20/P 120，日本）用于柱色谱。此外，TLC试验是在预涂硅胶GF254板上散漫紫内线妨碍的。

补骨脂于2018年8月从中国河北省安国市购买。由马林传授（IMM，CAMS）判断为补骨脂（Psoralea corylifolia L.），标本（ID-201846）寄存在中国医学迷信院药物钻研所（IMM）的动物标本室。

2 试验方式

2.1 提取与别离

补骨脂（10kg）用95％乙醇室温浸提（每一次60L，浸泡1周），浸提2次。并吞浸提液，过滤，接管乙醇患上1350g提取物。乙醇提取物与硅胶拌样，经由硅胶柱色谱别离。用煤油醚，煤油醚/乙酸乙酯（20：1-2：1），乙酸乙酯，乙酸乙酯/甲醇（4：1-1：1）以及甲醇妨碍洗脱，患上到132个洗脱全副（A1-A132）。将流分A32-A53并吞约60g，与MCI拌样，妨碍MCI柱色谱别离，用50%至100%的甲醇梯度洗脱，患上到20个洗脱全副（B1-B20）。将流分B5-B9并吞约7.8g，妨碍中压液相色谱别离，用75%至100%的甲醇梯度洗脱，患上到40个洗脱全副：C1-C40。流分C7经由反相液相色谱（47%的乙腈水溶液洗脱）妨碍纯化，患上到化合物3（5mg）以及化合物4（5mg）。流分C9经由反相液相色谱（55%的乙腈水溶液洗脱）妨碍纯化，患上到化合物1（5mg）。流分C14经由反相液相色谱（73%的甲醇水溶液洗脱）妨碍纯化，患上到化合物10（4mg）。流分C21经由反相液相色谱（苯基柱，70%的甲醇水溶液洗脱）妨碍纯化，患上到化合物9（7mg）。流分C26经由反相液相色谱（苯基柱，70%的甲醇水溶液洗脱）妨碍纯化，患上到化合物2（5mg）以及化合物8（6mg）。组分B13-B14并吞约11.2g，用80%~95%的甲醇水溶液妨碍中压液相色谱的梯度洗脱，患上到55个洗脱全副：D1-D55。流分D22-D23经由反相液相色谱（87%的乙腈水溶液洗脱）妨碍纯化，患上到化合物7（7mg）。流分D38-D39经由反相液相色谱（92%的甲醇水溶液洗脱）妨碍纯化，患上到化合物5（6mg）以及化合物6（6mg）。

2.2 PTP1B酶的抑制活性测试

在hGST-PTP1B-BL21大肠杆菌中过表白的人GST-PTP1B酶基因重组卵白，并经由GST亲以及层析纯化。试剂pNPP用作丈量PTP1B酶的活性的底物。在室温下将化合物，阴性比力CC06240[20](10 μ)以及酶预孵育5 min。在终体积为100 μL，含有50 mol/Lm HEPES，5 mol/LM DTT，150 mol/LM NaCl，2 mol/LM EDTA以及2 mol/LM pNPP（pH 7.0）的活性系统中丈量，在30 ℃孵育10 min，而后削减50 μL 3mol/L NaOH。而后，在405 nm的波短处丈量吸光度。不GST-PTP1B卵白的相似系统用作空缺，化合物的每一种浓度在3个平行峰中妨碍测试。运用Microsoft Excel软件合计IC50值，阴性比力的IC50值为0.77 μmol/L。

3 已经知化合物1~10的化学结构判断

化合物1:黄色粉末，依据高分说质谱份子离子峰 m/z 323.1272 [M + H]+（合计值为323.1278）判断其份子式为C20H18O4。1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δH: 1.77 (3H, s, H-6′), 3.01 (1H, dd, J = 7.5, 15.0 Hz, Ha-3′), 3.31 (1H, dd, J = 9.5, 15.0 Hz, Hb-3′), 3.50 (1H, m, H-6a), 3.59 (1H, t, J = 10.5 Hz, Ha-6), 4.22 (1H, dd, J = 5.0, 10.5 Hz, Hb-6), 4.91 (1H, br s, Ha-5′), 5.08 (1H, br s, Hb-5′), 5.19 (1H, t, J = 8.5 Hz, H-2′), 5.49 (1H, d, J = 6.5 Hz, Ha-11), 6.36 (1H, a, H-8), 6.36 (1H, a, H-4), 6.40 (1H, s, H-10), 7.07 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-7), 7.27 (1H, s, H-1)。13C NMR (CDCl3, 150 MHz) δC: 126.4 (C-1), 120.8 (C-2), 161.2 (C-3), 98.3 (C-4), 156.1(C-4a), 66.6 (C-6), 39.4 (C-6a), 119.5 (C-6b), 126.4 (C-7), 107.5 (C-8), 160.7 (C-9), 98.3 (C-10), 156.8 (C-10a), 79.2 (C-11a), 112.2 (C-11b), 86.7 (C-2′), 33.8 (C-3′), 143.7 (C-4′), 111.8 (C-5′), 17.1 (C-6′)。以上数据与文献比力不同，故判断化合物1为seputhecarpan A。

化合物2:黄色晶体，依据高分说质谱份子离子峰 m/z 257.1896 [M + H]+（合计值为257.1900）判断其份子式为C18H24O。1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δH: 1.19 (3H, s, H-16), 1.62 (3H, s, H-14), 1.67 (3H, s, H-15), 5.02 (2H, m, H-18), 5.88 (1H, dd, J = 10.5, 17.5 Hz, H-17), 6.05 (1H, d, J = 16.5 Hz, H-8), 6.25 (1H, d, J = 16.5 Hz, H-7), 6.76 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-3以及H-5), 7.24 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-2以及H-6)。13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δC: 130.8 (C-1), 127.3 (C-2), 115.3 (C-3), 154.7 (C-4), 115.3 (C-5), 127.3 (C-6), 126.4 (C-7), 135.7 (C-8), 42.5 (C-9), 41.3 (C-10), 23.2 (C-11), 124.8 (C-12), 131.3 (C-13), 17.6 (C-14), 25.7 (C-15), 23.3 (C-16), 145.9 (C-17), 111.9 (C-18)。以上数据与文献比力不同，故判断化合物2为补骨脂酚。

化合物3:黄色油状物，依据高分说质谱份子离子峰 m/z 295.1664 [M + Na]+（合计值为295.1669）判断其份子式为C18H24O2。1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δH: 1.16 (3H, s, H-16), 1.30 (3H, s, H-14), 1.30 (3H, s, H-15), 5.02 (2H, m, H-18), 5.88 (1H, dd, J = 10.5, 17.5 Hz, H-17), 5.63 (2H, a, H-11, H-12), 6.05 (1H, d, J = 16.5 Hz, H-8), 6.24 (1H, d, J = 16.5 Hz, H-7), 6.77 (2H, d, J = 8.0 Hz, H-3以及H-5), 7.23 (2H, d, J = 8.0 Hz, H-2以及H-6)。13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δC: 130.5 (C-1), 127.4 (C-2), 115.4 (C-3), 154.9 (C-4), 115.4 (C-5), 127.4 (C-6), 126.8 (C-7), 135.2 (C-8), 42.6 (C-9), 43.9 (C-10), 123.1 (C-11), 141.0 (C-12), 70.9 (C-13), 29.9 (C-14), 29.9 (C-15), 23.5 (C-16), 145.5 (C-17), 112.2 (C-18)。以上数据与文献[23]比力不同，故判断化合物3为13-羟基异补骨脂酚。

化合物4:黄色油状物，依据高分说质谱份子离子峰 m/z 273.1844 [M + H]+（合计值为273.1849）判断其份子式为C18H24O2。1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δH: 1.19 (3H, s, H-16), 1.70 (3H, s, H-14), 4.04 (1H, t, J = 6.5 Hz, H-12), 4.84 (1H, s, H-15), 4.94 (1H, s, H-15), 5.03 (2H, m, H-18), 5.86 (1H, dd, J = 10.5, 17.5 Hz, H-17), 6.03 (1H, d, J = 16.5 Hz, H-8), 6.25 (1H, d, J = 16.5 Hz, H-7), 6.77 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-3以及H-5), 7.24 (2H, d, J = 8.5 Hz, H-2以及H-6)。13C NMR (CDCl3, 100 MHz) δC: 130.6 (C-1), 127.4 (C-2), 115.4 (C-3), 154.8 (C-4), 115.4 (C-5), 127.4 (C-6), 126.7 (C-7), 135.5 (C-8), 42.1 (C-9), 36.8 (C-10), 29.6 (C-11), 76.5 (C-12), 147.3 (C-13), 17.5 (C-14), 111.4 (C-15), 23.4 (C-16), 145.7 (C-17), 112.1 (C-18)。以上数据与文献比力不同，故判断化合物4为12-羟基异补骨脂酚。

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