蛋清溶菌酶的提取及其酶学性子探究（二）

2.1.3 NaCl溶液（洗脱液）浓度优化

由图3可知，蛋清随NaCl浓度的溶菌着落，溶菌酶的酶的酶学比精力先回升后着落，当NaCl浓度为1moL/L时，及其究所患上溶菌酶的性探比精力最高，此时的蛋清洗脱液浓度适量提取别离溶菌酶。当NaCl浓度高于1moL/L时，溶菌酶的酶的酶学比精力反而着落，酶含质变换却不大，及其究可能因为溶菌酶在高浓度盐溶液中发生盐析浸染导致。性探

2.1.4 洗脱光阴优化

由图4可知，蛋清当洗脱光阴为60min时，溶菌所患上溶菌酶的酶的酶学比精力最高，随着洗脱光阴不断缩短，及其究酶含量削减飞快，性探酶比精力反而着落，综合思考经济老本，选定洗脱光阴为60min。

2.2 阳离子替换法条件优化

综上，由单因素试验服从可知，阳离子替换法最优工艺条件为：蛋清滤液树脂比为10∶2.5，pH9.0，NaCl（洗脱液）浓度1mol/L，洗脱光阴60min。由此，进一步做Box-Behnken试验优化阳离子替换法条件，试验妄想及服从如表2所示。

接管DesignExpert8.0.6软件妨碍合成，如表3所示。由表3可知，拟合模子的P=0.0014＜0.05，诠释模子与实际状态拟合优异。依据以上合成患上悉溶菌酶比精力R1对于自变量每一100mL蛋清滤液中树脂用量（A）、NaCl浓度（B）、蛋清滤液pH值（C）、洗脱光阴（D）的多元回归方程为：

R₁=20866.66-1432.26A+194.18B+486.75C+539.58D-961.62AB-1252.19AC-2929.88AD-21.46BC-2724.86BD+90.11CD-6079.24A²-5995.65B²-3410.58C²-3903.162。

由方程可知，溶菌酶比精力以及4个自变量之间具备清晰线性关连。回归方程的二次项系数比照大，交互项系数中AD、BD的交互系数很大，诠释树脂用量以及洗脱光阴、NaCl浓度以及洗脱光阴之间的交互效应很大，AB、AC的交互系数较大，诠释树脂用量以及NaCl浓度之间、树脂用量以及pH值之间交互效应较大，而BC、CD的交互系数比照小，诠释NaCl浓度以及pH值之间、pH值以及洗脱光阴之间的交互效应小。

为了魔难方程的实用性，对于测定的溶菌酶的比精力的数学模子妨碍方差合成，并对于各因子的偏回归系数妨碍检测。一次项中A的回归系数较清晰，P=0.0806，诠释蛋清树脂比对于提取的溶菌酶比精力有较清晰浸染。二次项中A、B、C、D的偏回归系数均达到极清晰水平。交互项AD、BD回归系数较此外因素清晰，诠释树脂用量以及洗脱光阴、NaCl浓度以及洗脱光阴之间的交互项对于溶菌酶比精力影响较为清晰。

为了患上到最高的溶菌酶比精力，吸拥护洗脱的各条件需要适量的交织抉择。响应面图可直不雅反映各因素及交互浸染对于酶精力的影响，故取3项清晰性较高的交互项制作响应面图，依据图5～7的Box-Behnken优化试验拟合响应曲面图以及方差合成患上悉，对于溶菌酶比精力影响巨细挨次为AD＞BD＞AC。

对于二次回归方程求一阶偏导，当响应值R₁（溶菌酶比精力）为最大值时，各因子水平为每一100mL蛋清滤液中，树脂用量（A）为24.20mL、NaCl浓度（B）为1.00mol/L、蛋清滤液pH值（C）为9.十、洗脱光阴（D）为62.61min。此时事实预料溶菌酶比精力为21041.1U/mg。

对于所取患上的阳离子替换法各最优条件做平行验证试验，重复5次，如表4所示，患上到的溶菌酶比精力为20509.58U/mg，与事实值挨近。

申明：本文所用图片、翰墨源头《中国食物报》，版权归原作者所有。如波及作品内容、版权等成果，请与本网分割

相干链接：溶菌酶，蛋清，阳离子替换