五味子多糖均质酶解提取工艺优化（二）

二、味多响应面优化

（1）BBD试验妄想及服从

在单因素试验根基上，糖均牢靠果胶酶加酶量1.33%，质酶溶剂质料比25mL/g，解提选取提取温度（A）、取工均质转速（B）以及提取光阴（C）这三个清晰因素为审核变量素，艺优每一个因素取三个水平，味多妨碍BBD试验，糖均以多糖提取患上率（Y%）为响应值，质酶对于提取工艺条件妨碍响应面优化。解提试验妄想及服从见表1。取工依据BBD试验服从，艺优用Design-Expert.8.0软件妨碍响应面合成，味多以多糖提取率为响应值分说对于各因素妨碍多元线性回归拟合，糖均患上到回归模子为：Y=10.53+0.53A+0.37B+0.11C-0.026AB-0.67AC-1.20BC-4.32A²-3.20B²-2.20C²；接管F魔难妨碍方差合成，质酶服从见表2。由表2可知，回归模子清晰水平P＜0.0001，表明回归模子清晰精确，模子判断系数R²=0.9829，表明效应值的变换有98.29%以上是来自自选变量，本试验模子预料值与实际丈量值具备高度的相干性，该模子的失拟度不清晰性差距，表明回归方程能较好地模拟着实曲面，魔难方式可行。

本试验回归模子的调整判断系数R²_Adj=0.9609，诠释该模子能批注96.09%试验数据的变同性。此数据表明，该模子拟合水平优异，试验误差相对于较小。失拟项P=0.1121＞0.05，该试验变异系数C.V.%=10.87，据此证实可用该模子方程合成以及预料区别提取条件下五味子多糖患上率。由表2可知A因素对于五味子多糖患上率有极清晰影响，B因素影响十赫然晰，其次是C因素影响，影响挨次为：A＞B＞C。

（2）响应面合成及工艺优化

运用Box-Behnken软件，依据建树的回归方程作出3D响应面图（图3）。从图3的3D图中合成可知，两因素对于提取患上率的交互浸染由大到小挨次为闪提速率以及提取温度＞提取光阴以及提取温度＞闪提转速以及提取光阴。

牢靠提取光阴2min，提取温度以及均质转速对于多糖提取患上率的交互影响如图3（a）所示，在8500～15280r/min以及35.00～48.52℃畛域内均质转速削减以及提取温度着落提取患上率削减，之后随均质转速以及温度的削减提取患上率快捷着落，诠释在未必的畛域内削减均质转速、着落提取温度，有利于机关细胞的破碎、多糖的消融以及散漫，提取患上率削减；从3D图可能发现均质转速以及提取温度对于提取患上率的影响水平挨近；可是过高的提取温度以及均质转速可能会造成多糖降解、结构被破损，使患上提取患上率着落。

当均质转速确定时，提取温度以及提取光阴对于多糖提取患上率的交互影响如图3（b），在1.00～2.05min以及35.00～47.66℃畛域内随提取光阴以及提取温度的削减多糖提取患上率增大，超过这一畛域缩短提取光阴以及着落提取温度多糖提取患上率逐步着落，提取温度对于患上率的影响水平清晰高于提取光阴的影响，主要原因可能是提取温度既影响多糖的消融、散漫，又会影响到酶的活性，而在高速剪切浸染下提取光阴对于多糖的消融以及散漫的影响是有限的。

当提取温度确定时，提取光阴以及均质转速对于多糖提取患上率的交互影响如图3（c）所示，由图可能发现较高的均质转速以及较长的提取光阴有利于多糖的提取，但闪提转速对于多糖提取患上率的影响水平清晰高于提取光阴的影响；诠释在未必的转速畛域内，削减均质转速机关细胞的破碎水平愈加残缺，利于多糖的消融、传质，提取患上率快捷削减；超过未必畛域削减均质转速以及光阴可能会导致多糖结构被破损致使多糖提取患上率着落。

经由依据Box-Behnken软件对于试验服从以及响应面合成，取患上均质酶解提取五味子多糖的最佳工艺条件为：提取光阴1.92min、提取温度50.82℃、均质转速16319.73r/min。在此优化条件下妨碍提取试验，五味子多糖的预料提取患上率为9.39%。选取果胶酶量1.33%、提取光阴2min、提取温度51℃、均质转速16320r/min为试验条件，提取3次，合计多糖的平均提取患上率为10.03%，与模子预料患上率9.39%挨近，诠释建树的模子精确、坚贞，可能用来预料五味子多糖的提取患上率。

三、区别提取工艺提提取功能的比照

分说取3g预解决样品，用均质酶解以及热回流提取五味子粗多糖，均质酶解提取患上率为10.01%，热回流粗多糖提取患上率为7.13%，均质酶解提取的提取患上率普及40.39%；均质酶解提取光阴2min，热回流提取光阴是240min，光阴着落了99.17%。为了比照2种提取工艺的提取功能，对于热回流提取以及均质酶解提取后的样品机关接管扫描电镜妨碍了审核，图4（a）为热回流提取后的五味子样品机关的宏不雅结构，图4（b）为均质酶解提取后的样品的宏不雅结构。从扫描电镜图可审核到热回流4h后的五味子样品放大600倍时，五味子细胞机关的宏不雅结构相对于比照残缺，而将均质酶解提取后的样品放大400倍，审核到细胞机关的宏不雅结构有较洪流平的破碎，这是在散漫机的强剪切以及酶解的配合浸染下细胞机关有较洪流平的破碎，便于多糖的快捷消融、散漫，提取患上率大幅普及、光阴极短、能耗着落。因此均质酶解为动物活性多糖的提取提供了一种功能的绿色提取技术。
 

三、论断

经由单因素试验审核了各因素对于多糖提取患上率的影响秩序以及水平，牢靠果胶酶浓度为1.33%，接管响应面法优化患上到了五味子多糖的最佳均质酶解提取工艺参数：提取光阴1.92min，提取温50.82℃，均质转速16319.73r/min，该条件下多糖提取患上率为10.01%，与模子预料值9.39%挨近，诠释建树的模子精确、坚贞。本试验所接管的均质酶解法不光光阴短、提取率较高，而且操作方式重大，为动物活性多糖的提取提供一种功能的、绿色提取技术。

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