免疫亲以及色谱与份子印迹技术(一)

重大样品中痕量农药残留的免疫别离、传染以及稀释是亲及农药残留合成中最简短的使命，对于合成的色谱术精确性以及坚贞性影响很大。传统的份印别离传染伎俩如液液调配、薄层色谱、迹技柱色谱传染等费时费劲，免疫需要运用较多的亲及有机溶剂，重大的色谱术样品前解决历程还重大造成痕量指标合成农药的变性以及损失。同相萃取等方式运用指标合成物与杂质理化性子的份印差距完因素袂传染，其抉择性依然有限，迹技对于一些理化性子相近的免疫非指标合成物仍是难以实用别离去除了，对于后续的亲及合成会产生干扰。因此钻研开辟具备高抉择性别离富集功能的色谱术农药残留别离传染技术是农药残留合成技术的紧张钻研内容之一。

一、份印免疫亲以及色谱

Axen等(1967)以及Cuatrecasas(1968)的迹技开拓性使命奠基了免疫亲以及色谱(i妹妹uno-affinity chromatography，IAC)的钻研根基。从20世纪80年月前期开始，免疫亲以及色谱作为一项颇具发展后劲的功能别离富集技术受到关注，国内外已经有良多对于运用免疫亲以及色谱法别离富集区别物资的文献报道，对于重大样品提取液中的指标合成农药、兽药、毒素、种种卵白质等具备清晰的别离纯化成果，富集功能高。卵白质粗提液经由免疫亲以及色谱传染，可达到电泳纯水平，并具备很高的接管率。因此免疫亲以及色谱在医学魔难、食物卫生魔难、情景监测等畛域具备很高的钻研运用价格。

(一)免疫亲以及色谱基源头根基理及主要特色

免疫亲以及色谱是运用抗原与抗体的高亲以及性、专一性以及可逆散漫的道理而建树的一种色谱方式。农药的免疫亲以及色谱因此抗农药特同性抗体为配体，将其牢靠到适量的固相载体上，制备免疫亲以及色谱牢靠相以及免疫亲以及色谱柱，运用农药小份子的反映原性以及抗原抗体散漫的特同性以及在未必条件下可逆解离的道理妨碍色谱别离。当含有指标合成农药的粗提液经由免疫亲以及色谱柱时，样液中对于该抗体有亲以及性的农药就入抉择性地散漫到同定相上，淋洗去除了非指标合成物后，在适量条件下用大批溶剂洗脱，可抉择性地别离富集指标合成农药。免疫亲以及色谱个别惟独“加样-洗涤-洗脱”一步色谱就能使重大样品中极微量的特定组分患上到高度纯化以及稀释，所患上别离物比固相萃取物纯度高，稀释倍数可达数百甚至上千倍，便于间接接管气相色谱、功能液相色谱等方式妨碍检测，大大普及了样品前解决功能，削减了有机溶剂的运用以及提取历程中指标合成物的损失，具备特同性强、柱容量大、洗脱条件以及顺等特色。免疫亲以及色谱柱还可能很不便地再生以及重复运用，十分适用于重大样品中痕量农药残留的别离与富集，可实用着落样品合成的检测限，普及合成灵便度。

(二)农药免疫亲以及色谱法的建树

一、抗农药抗体的制备与纯化

在农药的免疫亲以及色谱中，作为牢靠相配体的抗农药抗体是最为紧张的资料。分解连结并突出指标合成农药结构特色的半抗原，将半抗原共价散漫到一个大份子载体(如牛血无辜卵白等)上制备家养抗原，以家养抗原免疫动物或者接管杂交瘤技术制备对于指标合成农药具特同性亲以及力的多克隆(polyclona1 antmody，PcAb)或者单克隆抗体(monoclonal antibody，McAb)。从20世纪90年月开始，运用基因工程技术制备抗体的钻研使命逐步睁开起来，这无疑会为规模化斲丧高功能抗体以及免疫亲以及色谱柱开拓了一条新蹊径。

抗体的纯度是制备高容量、高抉择性免疫亲以及色谱柱的主要因素之一。接管硫酸铵三步盐析法从抗血清中别离出的抗体，须进一步纯化后能耐作为配体，用于制备免疫亲以及色谱牢靠相。抗体的纯化方式包罗二乙氨乙基纤维素吸附法、离子替换柱色谱法及亲以及色谱法。二乙氨乙基纤维素对于血清卵白的吸附力远高于对于免疫球卵白(IgC)的吸附力，可能实用去除了血清中的非免疫球卵白。卵白A以及卵白G与IgC有很强的亲以及力，以卵白A或者卵白G为配体的亲以及色谱，条件以及顺，可能实用纯化抗体并连结抗体的免疫学活性。以家养抗原作为配体的亲以及色谱，也是取患上高活性纯化抗体的实用蹊径之一。平凡状态下，以农药半抗原与载体卵白的耦联物为家养抗原，以该家养抗原免疫动物制备多克隆抗体，其中有一全副抗体可能是针对于载体卵白的。以是可在抗血清或者多克隆抗体溶液中退出过多载体卵白妨碍反映，而后离心去除了载体卵白一抗体复合物，再别离去除了杂卵白，可能使抗指标合成农药的特同性抗体患上到纯化。

二、免疫亲以及色谱固相基质的抉择

近些年来，商品化的免疫亲以及色谱固相基质越来越多。事实的免疫亲以及色谱固相基质应该具备的条件有：①亲水性好，以便与亲水性的配体(抗体)以及水溶液中的指标合成物有较好的相容性；②其载体自身对于非指标合成物不吸附或者非特同性吸附十分小；③具备适量数目的化学基团可供活化以便与适量数目的配体实用耦联；④有较好的物理晃动性以及化学晃动性，能耐受配体牢靠化以及亲以及色谱中可能接管的种种条件(如pH、离子强度、温度、洗脱剂等)的影响；⑤具备多孔的网状结构，可能耦联更多的配体，被亲以及吸附的指标合成物可能从容地经由，从而增大配体与指标合成物的散漫量；⑥有优异的机械功能，可能负责未必的柱压，在运用条件下巩固形，连结晃动的柱体积。为使行动相有较好的流速，免疫亲以及色谱固相基质最佳是均一的球状颗粒。

参考资料：农药残留合成，版权归原作者所有，如波及作品内容、版权等成果，请与本网分割。

相干链接：农药，兽药，抗体，硫酸铵