板栗壳原花青素晃动性、结构合成及体外消化（一）

板栗属壳斗科栗属坚果类动物，板栗谢世界畛域内被作为紧张的壳原农作物之一。板栗深加工历程中产生少许的花青合成化板栗壳仍以焚烧以及人造侵蚀等方式解决，这样既造成为了资源浪费也无益于环保。素晃据资料呈现，动性板栗壳中含有色素、结构及体有机酸、外消多酚类、板栗多糖(或者苷类)以及鞣质等化学成份。壳原板栗壳的花青合成化多酚类物资主要组分为单宁，而单宁的素晃种类包罗良多，其中具备抗氧化活性结构的动性主要成份为鞣花单宁以及原花青素。人体内的结构及体从容基过剩会引起多种疾病，包罗血汗管疾病、外消白内障、板栗阿尔茨海默氏症等，可是体内的内源性抗氧化物资缺少以攻击细胞伤害，以是从食物资源中追寻人造抗氧化剂已经成为钻研热门。有钻研表明板栗壳原花青素具备抵御从容基、抑菌杀菌等浸染，可能宽泛运用于食物及调味品格业。丁培峰钻研了茶多酚在酱油中的防腐成果，服从呈现，茶多酚与纳他霉素复配运用后与山梨酸钾具备划一的防腐成果，且牢靠性大大降职。同时，茶多酚具备未必的保健成果，可普及酱油的营养价格以及保健功能。

多酚类物资尽管具备多种心理活性以及缩短调味品保质期的成果，可是外界条件也会影响其晃动性，从而着落它的心理活性，且人体中的胃液及肠道消化液也会对于多酚的活性产生影响。比喻，提取自姜黄根茎的多酚类化合物姜黄素的药理浸染宽泛，毒性小，而且临时以来作为调味品以及食物削减剂在国内外宽泛运用，可是，因为其生物运用度低清晰影响其运用价格。当初对于板栗壳原花青素的钻研主要在抗氧化性及提取优化等方面，对于其作为调味品功能性削减剂的开辟以及其在人体中的消化罗致钻研较少。因此，本试验探究影响板栗壳粗提物中原花青素晃动性的因素，运用HPLC-MS钻研其种类并妨碍结构表征，同时经由人体体外消化模子钻研其消化状态，为板栗壳中人造抗氧化剂的开辟及其在食物以及调味品方面的运用提供未必的参考依据。

一、资料与方式

一、资料与试剂

板栗：取自山东祁蒙山。

香草醛、α-淀粉酶、胆汁提取物、胰卵白酶、胃卵白酶：国药总体化学试剂有限公司；规范品表儿茶素、没食子酸、表儿茶素没食子酸酯、没食子儿茶素、没食子儿茶素没食子酸酯以及表没食子儿茶素没食子酸酯：上海阿拉丁生化科技股份有限公司。

二、仪器与配置装备部署

TG16-WS离神思长沙湘智离神思仪器有限公司；UV-1800紫外可见光分光光度计上海美诺达仪器有限公司；pH计梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；Agilent1100LC-MSD/TOF高分说液相质谱联用仪美国安捷伦科技公司。

三、试验方式

（1）板栗壳粗提物提取制备

将板栗壳洗净晾干，破碎捣毁过40目筛患上到板栗壳粉末。参考苏云霞等钻研患上到的最佳提取工艺，取过多板栗壳粉末退出70%乙醇水溶液，使料液比为1∶15(g/mL)，在65℃的条件下提取90min，再将提取液妨碍真空抽滤，滤液在40℃下真空稀释，再次冷冻去世板，高温保存备用。

（2）板栗壳粗提物中原花青素晃动性影响因素钻研

①板栗壳原花青素溶液的制备

称取板栗壳粗提物0.1g，用蒸馏水定容至100mL，钻研光照、温度、金属离子以及pH对于原花青素的影响。

②光照对于板栗壳原花青素的影响

取10mL板栗壳原花青素溶液3份，分说置于室温光照、室温避光以及高温避光的条件下，部署4d，每一隔1d取样测定样品溶液中原花青素含量(以保存率呈现)；原花青素保存率=样品待测时原花青素含量/样品初始原花青素含量×100%。原花青素的测定方式接管硫酸-香草醛比色法。

③温度对于板栗壳原花青素的影响

取10mL板栗壳原花青素溶液6份，分说在40，50，60，70，80，90℃条件下恒温水浴2h，原花青素含量测定方式同上。

④pH对于板栗壳原花青素的影响

取10mL板栗壳原花青素溶液14份，用HCl以及NaOH溶液配制成pH为1～14的溶液，将原花青素样品与10mLpH为1～14的溶液搅浑，密封静置6h，原花青素含量测定方式同上。

⑤金属离子对于板栗壳原花青素的影响

配制0.02mol/L含Fe³⁺、Fe²⁺、Ba²⁺等金属离子的溶液待用，再把区别金属离子溶液与原花青素溶液等体积搅浑，密封部署一段光阴，审核溶液色调变换。

（3）板栗壳原花青素结构合成

勤勉用液相测定没食子酸、没食子儿茶素、表儿茶素、没食子儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素没食子酸酯、表儿茶素没食子酸酯6种规范品及板栗壳粗提物出峰光阴，比照患上出板栗壳粗提物中所含物资，并对于粗提物妨碍高分说质谱结构合成。

色谱条件：色谱柱为DIONEXC₁₈(4.6妹妹×250妹妹，5μm)，行动相：甲醇(B)(体积分数为0.05%)-三氟乙酸(A)，梯度洗脱：0～12min，A：87%～75%，B：13%～20%；12～23min，A：75%～20%，B：25%～80%；23～26min，A：87%，B：13%。流速：0.5mL/min；检测波长：280nm；柱温：35℃；进样量：20μL。

质谱合成条件：色谱柱为LichrosphersC₁₈柱(4.6妹妹×250妹妹，5μm)；质谱进样分流比为1∶1；负离子模式；离子化方式：ESI；扫描畛域：m/z50～2000；去世板气温度：350℃；去世板气流速：15L/min；喷雾压力：40psi；毛细管电压：3500V。

（4）板栗壳原花青素的消化罗致

①消化系统的制备

胃液情景配制：在250mL烧杯中退出0.4g的胃卵白酶、9mg/mL的氯化钠溶液90mL混匀，再转入100mL的容量瓶中，用1mol/L盐酸调节使溶液pH为2～2.3，直至溶液至容量瓶刻度线。

肠道情景配制：在250mL烧杯中退出225mg的胰卵白酶、225mg的胆汁提取物、9mg/mL的氯化钠溶液90mL混匀，再转入100mL的容量瓶中，用1mol/L氢氧化钠调节使溶液pH为7～7.2，直至溶液至容量瓶刻度线。

②模拟胃液消化

配置5组平行试验以及1个空缺比力，每一组平行试验条件如下：在50mL锥形瓶中挨次退出中口腔消化液4mL、胃消化液16mL，于37℃、转速为250r/min的摇床中震撼反映2h，每一0.5h测1次pH值，经由测pH的变换可开始分说原花青素是否消化；并在反映光阴为0.5，1，1.5，2h各取1mL消化液，测定原花青素的含量，并合计其消化率；消化率=(1-测患上原花青素品质/最开始退出原花青素品质)×100%。

③模拟肠道消化

配置5组平行试验以及1个空缺比力，每一组平行试验条件如下：量取胃液消化液20mL，用氢氧化钠中以及到pH为7，妨碍胃液消化反映；再退出20mL肠道消化液反映2h，并在反映光阴0.5，1，1.5，2h各取1mL消化液测定原花青素的含量，并合计其消化率。

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