氨基甲酸乙酯降解酶的牢靠化钻研（三）

2.2.3 牢靠化EC降解酶的氨基乙醇耐受性

EC降解酶的乙醇耐受性在酒精饮料的运用中十分紧张。从图6可能看出，甲酸降解随着乙醇体积分数的乙酯研着落，游离酶以及牢靠化EC降解酶酶活均随之着落，牢靠但牢靠化EC降解酶对于乙醇呈现出优异的化钻耐受性。在乙醇体积分数为7％～25％时，氨基同定化EC降解酶酶活均能保存50％以上.同游离酶的甲酸降解乙醇耐受性比照，变换有未必差距，乙酯研开始判断此牢靠化方式对于其乙醇耐受性以及酶活普及有未必影响。牢靠诠释此牢靠化EC降解酶与游离酶比照，化钻在乙醇体积分数相对于较低时可能连结相对于较高的氨基酶活，适用于乙醇体积分数相对于较低的甲酸降解发酵酒精饮料。

2.2.4 牢靠化KC降解酶的乙酯研重复运用性

如图7所示，在模拟酒样对于牢靠化EC降解酶妨碍重复性试验，牢靠服从呈现，化钻每一次运用后酶活均有着落。当重复运用8次日后，牢靠化EC降解酶酶精力保存在50％以上，因此在8次前运用成果较好。

此服从与文献报道的GO-CS复条约定酸性酶运用10次时的酶活80％比照，可运用次数稍显劣势圈，但就所患上牢靠化酶而言，依然可能思考将运用次数尽量即便操作在8次之内以取患上更好的成果。

2.2.5 牢靠化EC降解酶的贮存晃动性

牢靠化EC降解酶在区别贮存温度随蕴藏时问的酶活变换如图8所示。在4℃条件下，酶活随时问逐步着落，酶活着落速率在1～3周以及4～6周的变换都较晃动，而在3～4周的变换最大：且蕴藏6周之内，酶活损失缺少30％。在20℃条件下，酶活随光阴缩短逐步着落，至第5周时根基连结巩固，但在蕴藏6周之后，酶活仅达到60％。诠释蕴藏温度对于同定化EC降解酶的酶活有未必影响，但不是仅有因素。因此在该试验条件下，尽量即便将牢靠化酶收藏在4～20℃，但基于牢靠化酶最适反映温度以及出于经济节约方面的思考，以20℃作为最佳蕴藏温度条件。

2.3 牢靠化酶对于“美乐”葡萄酒的影响

2.3.1 牢靠化酶在“美乐”葡萄酒中的晃动性

如图9所示，随着静置光阴削减，游离酶以及牢靠化EC降解酶酶活均泛起着落趋势，但存全部历程中，牢靠化酶酶活均高于游离酶酶活。当静置96h时，牢靠化酶酶活与游离酶酶活相差最大，相较于其后酶活差距，前期的差距更大，可能是南于相同酶量的条件下，其后游离酶更重大与底物打仗，而随着光阴推移，牢靠化酶因为载体的呵护浸染，仍能逐步呈现出较高的酶活性。静置144h以前，牢靠化酶酶活的损失率在50％如下，诠释此酶可能适应“美乐”葡萄酒的微情景，用于葡萄酒中EC的去除了。

2.3. 2牢靠化酶对于“美乐”葡萄酒中EC的去除了率

“美乐"葡萄酒样品中削减等量酶活的牢靠化EC降解酶以及游离酶一段光阴后，样品中EC品质浓度逐步着落。

从图10可能看出,样品中加酶解决后,解决组的EC品质浓度均低于比力组，解决组的EC去除了率高于比力组，诠释无论是游离仍是牢靠化EC降解酶的解决,均使“美乐”葡萄酒中EC品质浓度患上到了着落，但游离酶酶法去除了EC的成果要优于牢靠化酶解决法。在该试验条件下,牢靠化EC降解酶对于“美乐”葡萄酒中EC的去除了率可达30.90%,是游离酶的81.53%。

2.3.3 牢靠化酶对于“美乐”葡萄酒挥发性物资的影响

葡萄酒的风韵不是自力存在的，而是由醇、酯、酸、醛、酮、萜类化合物以及C13-萜烯类化合物相互调以及而产生的，它们配合组成为了葡萄酒香气的组成成份。对于“美乐”葡萄酒中香气化合物及其相对于含量妨碍了定性以及定量合成。

比力组以及解决组的葡萄酒中挥发性风韵物资的相对于含量如表1所示，在3种解决方式下的葡萄酒巾，共检测到29种香气成份，包罗12种酯类、9种醇类、3种有机酸以及5种醛、酮、酚类。经合成可知，区别解决组中各挥发性物资的相对于含量之间无清晰差距，可是相较于比力组，解决组的物资种类均有所削减，其中牢靠化酶解决组削减了8种物资，而游离酶解决组削减了12种物资。诠释酶解决对于葡萄酒巾挥发性物资的种类数目有些许影响，但对于化合物的相对于含量影响不清晰，而且，牢靠化酶解决方式对于葡萄酒愈加友好。比照比力组.酶解决组中的物资均泛起了数目的削减，但消逝的物资并不相同，牢靠化酶解决组削减的物资包罗：香茅醇、正癸醛、己酸乙酯、辛酸乙酯、乙酸异戊酯、乙酸己酯、乙酸苯乙酯以及异丙醇。而游离酶解决组削减的物资分说是香茅醇、卢一大马士酮、糠醛、正癸醛、己酸乙酯、苯乙酸乙酯、乙酸异戊酯、乙酸苯乙酯、丁二酸二乙酯、2，3一丁二醇、异丙醇、1一己醇。诠释区别规范的酶解决对于葡萄酒的影响区别，但思考到游离酶引起馥郁味以及果香味物资的损失更大，F向于在思考风韵重大性时要防御不悲痛风韵的发展，因此倡导对于“美乐”葡萄酒运用牢靠化EC降解酶妨碍解决。

此外，区别解决组测患上的挥发性风韵化合物的组成也有清晰区别。表1以及图11呈现了“美乐”葡萄酒中区别酶解决方式下主要挥发性香气成份(醇、酯类、酸以及醛)的变换纪律。

南C6化合物、挥发性酚类物资以及苯类化合物组成的香气成份在“美乐”葡萄酒中随着酶解决方式的区别而泛起出差此外趋势。酶解决后醇类以及醛类占比着落，而酯类以及酸类均有所削减，其余类根基连结巩固，表明差此外酶解决方式对于挥发性香气化合物产生了未必影响。尽管酶解决方式对于葡萄酒巾挥发性物资的相对于含量不清晰影响，但引起了香气物资种类的削减以及香气成份的改动，且游离酶对于其倒楣影响要大于同定化酶。因此，在人们负责风韵有所改动的条件下，同定化EC降解酶更顺运用于“美乐”葡萄酒。

3 结语

经由对于壳聚糖与戊二醛的交联条件妨碍优化后发现，以体积分数5％的戊二醛溶液作交联剂，交联反映妨碍8h时，载体对于酶的牢靠量达到最大。之后对于EC降解酶的酶学性子睁开合成，患上到如下服从：牢靠化EC降解酶的最适温度是42℃，在此温度下部署24h时相对于酶活达60％以上；其最适DH是3.6，在此条件下部署24h的相对于酶活大于60％：在体积分数7％～25％乙醇下，酶活均连结在50％以上，诠释该牢靠化酶的乙醇耐受畛域广，催化活性高：该酶在重复运用8次后，酶活还连结在50％以上.而且分说在4℃以及20℃下蕴藏6周后的酶活损失率缺少30％币H40％。最后，接管ATPS散漫GC-MS检测区别酶解决的“美乐”葡萄酒中含有的EC，患上悉同定化EC降解酶的EC去除了率达30.90％，是游离酶的81.53％。EC降解酶的解决方式对于葡萄酒中挥发性物资的相对于含量不清晰影响，只是引起了香气物资种类的削减以及香气成份的改动，但牢靠化酶对于挥发性风韵物资的倒楣影响远低于游离酶。

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