睡菜醋酸乙酯部位化学成份及其神经呵护浸染钻研（三）

化合物13：黄色针晶，睡菜神经EI-MS：m/z 624 +，醋酸成份份子式为C28H32O16。乙酯1H NMR (400 MHz,部位 DMSO-d6) δ: 7.87 (1H, s, H-2′), 7.53 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-6′), 6.93 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5′), 6.41 (1H, s, H-8), 6.20 (1H, s, H-6), 5.45 (1H, d, J = 7.2 Hz, Glc, H-1′′), 4.44 (1H, br s, Rha, H-1′′′), 3.27 (3H, s, -OCH3), 0.99 (3H, d, J = 6.2 Hz, Rha C-6′′′), 0.99 (3H, d, J = 6.1 Hz, Rha, H-6′′′)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ: 177.3 (C-4), 164.5 (C-7), 161.2 (C-5), 157.1 (C-2), 156.1 (C-9), 149.1 (C-4′), 147.5 (C-3′), 133.1 (C-3), 122.4 (C-6′), 121.2 (C-1′), 115.4 (C-5′), 113.4 (C-2′), 103.4 (C-10), 102.2 (C-1′′), 101.0 (C-1′′′), 99.6 (C-6), 94.4 (C-8), 76.7 (C-3′′), 76.1 (C-5′′), 74.5 (C-2′′), 72.1 (C-4′′′), 70.9 (C-2′′′), 70.7 (C-4′′), 70.3 (C-3′′′), 68.5 (C-5′′′), 67.2 (C-6′′), 56.0 (-OCH3), 18.0 (C-6′′′)。以上数据与文献报道不同，化学呵护故判断该化合物为槲皮素-3-O-芸香糖苷。及其浸染

化合物14：黄色粉末，钻研EI-MS：m/z 222 +，睡菜神经份子式为C13H18O3。醋酸成份1H NMR (400 MHz,乙酯 CD3OD) δ: 7.01 (1H, d, J = 15.8 Hz, H-7), 6.46 (1H, d, J = 15.8 Hz, H-8), 5.97 (1H, m, H-4), 2.65 (1H, d, J = 17.8 Hz, H-2), 2.32 (3H, s, H-10), 1.91 (3H, d, J = 1.4 Hz, H-13), 1.07 (3H, s, H-12), 1.01 (3H, s, H-11)；13C NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 199.2 (C-9), 199.0 (C-3), 163.1 (C-5), 147.0 (C-7), 130.4 (C-8), 126.5 (C-4), 78.4 (C-6), 49.2 (C-2), 41.7 (C-1), 26.3 (C-10), 23.4 (C-12), 22.1 (C-11), 17.5 (C-13)。以上数据与文献报道不同，部位故判断该化合物为去氢吐叶醇。化学呵护

化合物15：无色油状物，及其浸染EI-MS：m/z 224 +，钻研份子式为C13H20O3。睡菜神经1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 5.70 (1H, d, J = 15.5 Hz, H-7), 5.63 (1H, d, J = 15.5 Hz, H-8), 5.78 (1H, br s, H-4), 4.19 (1H, d, J = 6.4 Hz, H-9), 2.35 (1H, d, J = 16.6 Hz, H-2a), 2.05 (1H, d, J = 16.6 Hz, H-2b), 1.82 (3H, d, J = 1.2 Hz, H-13), 1.11 (3H, s, H-10), 0.93 (3H, s, H-11), 0.91 (3H, s, H-12)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ: 197.5 (C-3), 164.5 (C-5), 135.8 (C-7), 127.9 (C-8), 125.5 (C-4), 77.9 (C-6), 65.9 (C-9), 49.4 (C-2), 41.0 (C-1), 24.1 (C-10), 23.7 (C-12), 23.1 (C-11), 19.0 (C-13)。以上数据与文献报道不同，故判断该化合物为布卢门醇A。

化合物16：红色无定形粉末, EI-MS：m/z 196 +，份子式为C11H16O3。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 5.73 (1H, s, H-7), 4.18 (1H, m, H-3), 2.42 (1H, dt, J = 14.0, 2.8 Hz, H-4b), 2.01 (1H, dt, J = 14.5, 2.8 Hz, H-2b), 1.77 (3H, s, H-11), 1.75 (1H, dd, J = 14.0, 3.8 Hz, H-4a), 1.51 (1H, dd, J = 14.5, 3.8 Hz, H-2a), 1.47 (3H, s, H-9), 1.27 (3H, s, H-10)；13C NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 185.4 (C-6), 174.4 (C-8), 113.2 (C-7), 88.8 (C-5), 67.2 (C-3), 47.7 (C-2), 46.3 (C-4), 37.2 (C-1), 30.7 (C-10), 27.1 (C-11), 26.6 (C-9)。以上数据与文献报道不同，故判断该化合物为黑麦草内酯。

化合物17：黄色油状物，EI-MS：m/z 196 +，份子式为C12H20O2。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 6.75 (1H, dd, J = 7.1, 1.3 Hz, H-3), 5.88 (1H, dd, J = 17.2, 10.7 Hz, H-7), 5.21 (1H, dd, J = 17.2, 1.4 Hz, H-8a), 5.08 (1H, dd, J = 10.7, 1.4Hz, H-8b), 3.71 (3H, s, -OCH3), 2.19 (2H, m, H-4), 1.81 (3H, s, H-10), 1.62 (2H, m, H-5), 1.28 (3H, s, H-9)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 168.7 (C-1), 144.4 (C-7), 142.1 (C-3), 127.6 (C-2), 112.2 (C-8), 73.1 (C-6), 51.7 (-OCH3), 40.7 (C-5), 27.9 (C-9), 23.5 (C-4), 12.2 (C-10)。以上数据与文献报道不同，故判断该化合物为 (E)-6-羟基-2,6-二甲基辛-2,7-二烯酸甲酯。

化合物18：红色无定形粉末，EI-MS：m/z 432 +，份子式为C19H28O11。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.15 (1H, d, J = 6.5 Hz, H-6), 7.03 (1H, d, J = 2.9 Hz, H-2), 6.95-7.02 (2H, m, H-4, 5), 4.86 (1H, d, J = 6.6 Hz, Glc, H-1′), 4.72 (1H, d, J = 1.2 Hz, Rha, H-1′′), 3.86 (3H, s, 3-OCH3), 1.21 (3H, d, J = 5.2 Hz, Rha, H-6′′)；13C NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 150.7 (C-3), 147.8 (C-1), 124.3 (C-2), 122.2 (C-5), 118.5 (C-6), 113.5 (C-4), 102.5 (C-1′), 102.2 (C-1′′), 77.9 (C-3′), 76.8 (C-5′), 75.0 (C-2′), 74.1 (C-3′′), 72.3 (C-4′′), 72.2 (C-2′′), 71.5 (C-4′), 70.1 (C-5′′), 67.9 (C-6′), 56.8 (-OCH3), 17.9 (C-6′′)。以上数据与文献报道不同，故判断该化合物为3-甲氧基苯酚-1-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物19：浅黄色粉末，EI-MS：m/z 134 +，份子式为C7H6N2O。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 10.71 (2H, s, 2×NH), 7.04-6.97 (4H, m, H-5, 6, 7, 8)；13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ: 155.3 (C-2), 129.7 (C-4, 9), 120.4 (C-6, 7), 108.5 (C-5, 8)。以上数据与文献报道不同，故判断该化合物为2-羟基苯并咪唑。

化合物20：无色针状晶体，EI-MS：m/z 182 +，份子式为C9H10O4。1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 9.79 (1H, s, 1-CHO), 7.13 (2H, s, H-2, 6), 3.91 (6H, s, 3, 5-OCH3)；13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ: 190.5 (C-1), 147.1 (C-3, 5), 141.0 (C-4), 128.2 (C-1), 106.8 (C-6), 56.3 (3-OCH3, 5-OCH3)。以上数据与文献报道不同，故判断该化合物为syringaldehyde。

化合物21：无色粉末，EI-MS：m/z 138 +，份子式为C8H10O2。1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 7.25～7.38 (5H, m, H-2, 3, 4, 5, 6), 4.67 (1H, dd, J = 7.4, 4.7 Hz, H-1′), 3.64 (2H, m, H-2′)；13C NMR (100 MHz, CD3OD) δ: 143.4 (C-1), 129.1 (C-3, 5), 128.4 (C-4), 127.5 (C-2, 6), 76.1 (C-1′), 68.5 (C-2′)。以上数据与文献报道不同，故判断该化合物为1-苯基-1,2-乙二醇。

3.2 皮质酮对于PC12细胞伤害的浓度抉择

试验服从呈现，皮质酮对于PC12细胞的伤害水平随浓度呈依附性回升，450、550、650、750、850、950、1050、1150 μmol/L皮质酮浸染PC12细胞48 h后，其细胞存活率分说为88.81±2.21%、77.07±4.21%、52.47±0.99%、44.78±0.95%、34.26±0.91%、26.96±3.36%、12.32±0.22%、13.21±2.02%。见图1。

本服从验证了未必浓度的皮质酮确凿能伤害神经元，650 μmol/L皮质酮浸染48 h对于高分解PC12细胞的抑制率挨近50%，故抉择以体外650 μmol/L皮质酮48 h浸染于PC12细胞以模拟焦虑症神经细胞伤害状态，构建抗焦虑活性成份体外细胞筛选模子。

3.3 单体化合物对于皮质酮诱导的PC12细胞伤害的呵护浸染

试验服从呈现，与650 μmol/L皮质酮组比照，化合物一、二、三、四、五、七、九、十、十一、1五、1六、17与650 μmol/L皮质酮配合浸染PC12细胞48 h后，细胞存活率分说普及至92.29±2.31%、90.74±1.61%、91.62±1.83%、63.11±2.30%、61.01±1.21%、101.18±1.56%、105.23±1.11%、67.77±1.89%、65.66±1.06%、75.94±0.24%、64.39±1.47%、72.88±1.82%。苯丙素、木脂素、黄酮、单萜类均有区别水平的增长650 μmol/L诱导的PC12细胞增殖的浸染。其中，4-O-咖啡酰奎尼酸甲酯（1）、绿原酸甲酯（2）、绿原酸（3）、肿柄雪莲苷（7）、苏式-(7R,8R)-愈创木基丙三醇-8-香草醛醚（9）增长650 μmol/L诱导的PC12细胞呵护浸染最为清晰，试验服从见图2。

4 品评辩说

本钻研从睡菜全草醋酸乙酯部位别离并判断患上到21个化合物，包罗3个苯丙素类（1～3），2个香豆素类（4以及5），6个木脂素类（6～11），2个黄酮类（12以及13），4个单萜类（14～17），4个其余类（18～21）。同时审核了21个化合物对于皮质酮诱导伤害的PC12细胞的呵护浸染。服从表明化合物一、二、三、七、9呈现出清晰的呵护浸染，化合物四、五、十、十一、1五、1六、17呈现出中等的呵护浸染。

北五味子作为我国传统的安神药，近些年来的钻研报道了北五味子木脂素具备清晰的中枢抑制与安神浸染。合欢皮经钻研也证实其抗焦虑的主要活性成份是 (-)-丁香树脂酚-4-O-β-D-葡萄糖苷，其浸染机制可能与抑制PC12细胞线粒体凋亡无关。后续将进一步探究睡菜主要活性成份对于皮质酮伤害的PC12细胞的抗凋亡及呵护浸染机制，诠释睡菜抗焦虑活性的药效物资根基。

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