乳酸乳球菌胞外多糖提取纯化工艺钻研（二）

（3）除了卵白质中离心光阴的乳酸乳球优化

本试验中发酵液细胞别离后，退出50%的菌胞三氯乙酸溶液1/5体积，在16000×g的外多离心力下分说离心10min、20min、糖提30min、取纯40min，化工选取最优化离心光阴，艺钻研如图4所示。乳酸乳球离心的菌胞光阴选取30～40min为最佳。

三、外多乙醇积淀多糖条件的糖提优化

（1）乙醇积淀多糖中乙醇浓度的优化

本试验中发酵液细胞别离后，退出50%的取纯三氯乙酸溶液1/5体积，在16000×g的化工离心力下分说离心40min，退出3倍体积浓度分说为70%、艺钻研80%、乳酸乳球95%、100%的乙醇溶液，4℃条件下醇沉12h。透析，测定胞外多糖的产量，如图5所示。多糖的提取量随着乙醇浓度的削减而不断增大。一些小份子的多糖份子在低浓度的乙醇下不易积淀，惟独当乙醇浓度充实高时，才发生积淀。因此当乙醇浓度为100%时，达到最大值，即乙醇积淀多糖的最优浓度为100%。

（2）乙醇积淀多糖中乙醇体积的优化

卵白积淀后分说遵照1∶一、1∶二、1∶三、1∶4的料醇比退出浓度为100%的乙醇溶液，测定胞外多糖的产量，如图6所示。削减乙醇削减体积可能普及胞外多糖的取患上量，积淀中多糖提取率随乙醇削减倍数的削减而着落，可是当乙醇削减倍数在3～4倍时，EPS含量清晰普及，且都达到较高浓度，以是从提取老本思考，最佳的乙醇削减倍数为3倍。

（3）乙醇积淀多糖中积淀光阴的优化

乙醇积淀多糖中在4℃条件下分说醇沉12h、24h、36h，测定胞外多糖的产量，如图7所示。醇沉光阴与胞外多糖含量的关连不清晰。而试验历程中，退出乙醇后赶快产生积淀，而且随着醇沉光阴的削减，积淀物色调不断加深。为了保障粗多糖的纯度，醇沉光阴选12h最宜。

四、正交试验合成

分说选取影响EPS含量较大的提取条件，三氯乙酸浓度、离心力以及离心光阴妨碍三因素三水公平交试验，服从如表1。服从表明，影响EPS含量的各因素主次关连为B＞C＞A，离心力对于多糖提取的影响较大，离心光阴次之，三氯乙酸浓度对于多糖提取的影响最小。依据正交试验服从，患上出最优发酵条件组合为A₃B₂C₃，即60%的三氯乙酸浓度、在14000×g的离心力下离心40min。钻研表明，离心力以及离心光阴的削减可能普及卵白的脱离率，但会削减最终EPS含量，着落多糖提纯患上率，因此，在14000×g离心力下离心40min最佳，EPS含量可达到392.50mg/L。

三、论断

本名目以筛选出的胞外多糖高产菌乳酸乳球菌乳亚种LL9为菌种，妨碍EPS提取纯化工艺条件钻研。运用三氯乙酸法积淀卵白质，经由适量操作三氯乙酸的用量来着落对于EPS结构的破损。经由单因素试验及正交试验最终验证，发现当用浓度为60%三氯乙酸解决过发酵液后，在14000×g离心力下离心40min除了卵白成果最佳；积淀多糖的最优组合是3倍体积、浓度为100%的乙醇积淀12h。最优化别离纯化工艺条件为：削减三氯乙酸60%（w/v）（12h）→500r/min搅拌5min→离心积淀除了卵白（4℃，14000×g，40min）→上清加乙醇积淀多糖（100%，3倍体积，4℃，解决12h）→离心（12000×g，30min）→冷冻去世板→积淀温水消融（稀释10倍）→透析MD34（4℃，解决12h）。经试验验证工艺流程公平并可行。EPS含量最后达到392.50mg/L，产量为原来的1.49倍。为今落伍一步纯化以及深入钻研乳酸菌产胞外多糖的结谈判生物活性等提供参考。

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