功能液相色谱(HPLC)定量检测花椒麻味物资含量方式的建树（一）

花椒是液相指芸香科青椒以及红花椒等去除了种子以及杂质的去世板成熟果皮，主若是色谱树作为中药以及食物调味品。花椒在全天下250多种，定量的建主要扩散于亚洲、检测非洲、花椒含量美洲及大洋洲的麻味热带及亚热带区域，亚洲是物资花椒主产区，中国约有45种，液相13个变种。色谱树花椒在我国种植历史悠长，定量的建在我国的检测运用已经有两千余年的历史，它有未必的花椒含量药效成份，有杀虫、麻味止痒、物资抑菌、液相抑制血小板凝集、抗氧化等浸染。花椒中的主要化学成份有酰胺、生物碱、木脂素、挥发油等。

酰胺类物资是花椒的主要麻味成份，也是花椒主要的风韵物资。当初，从花椒中别离患上到的麻味物资总共25种，为一类链状不饱以及脂肪酰胺物资，其中山椒素是代表性的麻昧物资，具备强烈的鼓舞性，结晶后为红色晶体。其化学性子极不晃动，在室温下部署多少分钟后赶快酿成黄色胶状，易溶于甲醇以及丙酮，热乙醇，难溶于氯仿，不溶于煤油醚，因此花椒酰胺类物资需在高温低氧的条件下密封保存。因为花椒麻味物资不易保存，用HPLC法对于花椒中麻味物资的检测多在麻味物资别离纯化历程中，并接管与麻味物资的结构判断等相散漫方式，具备操作啰嗦等弱点。当初，国内外尚未建树无关花椒麻味物资评估的规范方式，2015年版《中华国夷易近共以及国药典》对于花椒的品质操作并无周全反映花椒活性成份，也未有可用于麻味检测的参比样品。因此，运用HPLC法检测花椒麻味物资含量就必须要制备规范品，这就加大了检测其含量的难度，从而限度了花椒的品质操作及规范系统等方面的运用。本文以试验室自制的花椒麻味物资为规范样品，建树了HPLC定量检测花椒麻味物资含量方式。期望为食物工业中花椒质料的筛选提供未必的事实依据，也为花椒产物的进一步开辟以及钻研奠基根基。

一、资料以及方式

一、试验资料

整粒花椒样品去世板破碎捣毁，过60目筛(孔径＜O.03妹妹)，备用，采自天下的花椒斲丧基地，如四川、陕西、云南等地；甲醇：合成纯，成都科龙试剂厂；甲醇：色谱纯，天津四友试剂公司。

二、主要配置装备部署

合成型功能液相色谱仪：LC-10AT型，配有紫外可见光检测器，日本岛津公司；色谱柱：HC-C18型，安捷伦公司；电子天平：FA2004型，感量O.0001，上海详尽电子仪器有限公司；电热恒温鼓风去世板箱：DHG-9030型，上海-恒迷信仪器有限公司。

三、方式

（1）花椒麻味物资的提取

将花椒麻味物资的提取可接管有机溶剂浸提法。操作方式是：称取未必量破碎捣毁混匀后的花椒粉末，退出20倍的合成纯甲醇于40℃～50℃水浴振荡浸提后，离心过滤，取其上清液定容患上待测样品液。

（2）色谱条件

检测条件：岛津LC-10AT型合成型功能液相色谱仪，HC-C18型色谱柱，以1.0mL／min15min50％甲醇以及水溶液梯度洗脱，10min70％甲醇以及水溶液洗脱，柱温为35℃，紫外检测波长254nm。

（3）检测方式

功能液相色谱(HPLC)的检测方式：外标法。以试验室自制的花椒麻味物资规范品为规范样品，经甲醇溶液消融并定容后配成一系列区别梯度的标样溶液。分说排汇未必量的标样注入色谱柱中，测卓越谱图中各指标物的峰面积，而后以HPLC的峰面积作为纵坐标，以对于应的花椒麻味物资含量作为横坐标作图，作规范曲线。而后排汇划一量经预解决的待测样品液，与相同条件下检测，从色谱图上测出花椒麻味物资的峰面积，在规范曲线上查出所对于应的待测样品中花椒麻味物资的含量。

（4）规范曲线的绘制

精确量取规范品(55μg／mL)，接管甲醇配制成一系列品质浓度的花椒麻味物资规范溶液(μg／mL)：O、十、20、30、40、45。而后分说抽取20μg溶液妨碍HPLC检测。以保存光阴为22～24min的峰为指标峰，以其HPLC峰面积为纵坐标，对于应标品浓度为横坐标，作规范曲线。

（5）方式学验证

分说对于试验妨碍精确度、详尽度、重复性以及加标接管率的合成测定。

二、服从

一、最佳色谱合成条件确凿定

经由少许的豫备试验，合成钻研了柱温对于别离成果的影响。在柱温为室温25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、45℃等温度妨碍试验，发现柱温为35℃时，事实塔板数最高，洗脱峰光阴距离最大。钻研中还发现，花椒麻味物资含量在0～300μg／mL畛域内，花椒麻味物资的含量以及响应峰的面积具备较高的线性相干度。

（1）洗脱剂最佳流速确凿定

为了探究最佳的别离条件，在紫外检测波长254nm，柱温35℃，用15min的50％～70％甲醇以及水溶液梯度洗脱以及10min70％甲醇以及水溶液洗脱，流速在0.8～1.2mL/min妨碍检测，别离成果以及峰形都不同(图l，2，3)。在1.2mL／min时出峰光阴最快，功能最高，但思考到1.2mL／min时色谱柱柱压过高，会严正影响色谱柱的运用年限，综合思考流速1.OmL/min为最佳成果。

（2）洗脱剂最佳梯度确凿定

当紫外检测波长为254nm，柱温为35℃，流速为1.0mL／min时，接管10min的50％甲醇以及水溶液梯度洗脱，15min70％甲醇以及水溶液洗脱；70％甲醇等度洗脱，接管15min的50％甲醇以及水溶液梯度洗脱，10min70％甲醇以及水溶液洗脱；以及其余梯度洗脱妨碍试验，服从表明检测条件为15min的50％甲醇以及水溶液梯度洗脱，10min70％甲醇以及水溶液时，洗脱的别离成果以及峰形最佳。

因此，本试验中所判断的HPLC检测条件为：岛津LC-10AT型合成型功能液相色谱仪，色谱柱为HC-C18柱(4.6妹妹×250妹妹)，15min的50％甲醇以及水溶液梯度妨碍洗脱，10min70％甲醇以及水溶液洗脱，流速为1.0mL/min，柱温35℃，紫外检测波长为254nm。

申明：本文所用图片、翰墨源头《中国食物削减剂》，版权归原作者所有。如波及作品内容、版权等成果，请与本网分割

相干链接：花椒，甲醇，花椒麻味