食用家养分解色素的测定

食用色素按其源头可分为食用人造色素以及食用分解色素两大类。食用色素食用人造色素是家养从有色的动、动物体内提取，分解经进一步别离精制而成。测定分解色素因其着色力强，食用色素易于调色，家养在食物加工历程中晃动功能好，分解价格高尚，测定在食用色素中占主要位置。食用色素当初，家养国内外运用的分解食用色素绝大少数都是食用分解色素。分解色素主要源头于煤焦油及其副产物，测定且在分解过譬皇?食用色素能受铅、砷等有害物资传染，家养因此在运用的分解牢靠性上，其争执要比其余类的食物削减型要岁突出以及锋利。中国答应运用的分解色素有9种：苋菜红、胭脂红、蛊惑红、新红、柠檬黄、日落黄、靛蓝、亮蓝、赤藓红。前6种为偶氮类化合物，运用中占绝大少数。食用分解色毒的测定方式主要有薄层色谱法以及功能液相色谱法。下面引奏功能液相色谱法测定食用分解着色剂。

一、道理

食物中家养分解着色剂用聚酰胺吸附法或者液-液调配法提取，制成水溶液，注入功能液相色谱仪，经反相色谱别离，依据保存光阴定性，与峰面积比照遏制定量。

二、试剂

①盐酸。

②乙酸。

③正己烷。

④甲醇：经滤膜(O.5μm)过滤。

⑤酰胺粉(尼龙6)：过200目筛。

⑥乙酸铵溶液0.02m01/L。称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL消融，经0.45μm滤膜过滤。

⑦水取2mL氨水，加水至100mL混匀。

⑧水一乙酸铵溶液0.02mol/L。取氨水0.5mL加乙酸铵溶液(O.02mot／L)至1000mL混匀。

⑨甲醇一甲酸溶液6+4。取甲醇60mL，甲酸40mL混匀。

⑩柠檬酸溶液：取20g柠檬酸(C₆H₈0₇·H₂0)加水至100mL，消融混匀。

⑪无水乙醇-氨水-水溶液7+2+1。取无水乙醇70mL、氨水20mL、水lOmL混匀。

⑫三正辛胺正丁醇溶液 5％。取三正辛胺5mL，加正丁醇至100mL混匀。

⑬饱以及硫酸钠溶液。

⑭硫酸钠溶液：2g／L。

⑮pH6的水水加柠檬酸溶液调pH6。

⑯分解着色剂规范溶液精确称取按其纯度折算为100％品质的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、新红、赤藓红、亮蓝、靛蓝各0.100g，置于lOOmL容量瓶中，加pH6的水到刻度，配成水溶液(1.00mg／mL)。

⑰分解着色剂规范运用液 临历时将上述溶液加水稀释20倍，经0.45μm滤膜过滤。配成每一毫升至关于50.0μg的分解着色剂。

三、仪器

功能液相色谱仪，带紫外检测器，254nm波长。

四、操作方式

(1)样品解决

①橘子汁、果味水、果子露汽水等：称取20.O～40.Og放入100mL烧杯中。含二氧化碳样品加热驱除了二氧化碳。

②配制酒类：称取20.0～40.0g放入100mL烧杯中，退出小碎瓷片数片，加热驱除了乙醇。

③硬糖、蜜饯类、淀粉软糖等：称取5.00～10.OOg，破碎捣毁样品，放入100mL小烧杯中，加水30mL，温热消融，若样品溶液pH较高，用柠檬酸溶液调pH至6左右。

④巧克力豆及着色糖衣废品：称取5.00～10.OOg，放入100mL小烧杯中，用水重复洗涤色素，至巧克力豆无色素为止，并吞色素漂洗液为样品溶液。

(2)色素提取

①聚酰胺吸附法：样品溶液加柠檬酸溶液调pH为6，加热至60℃，将1g聚酰胺粉加少许水调成粥状，倒入样品溶液中，搅拌片刻，以G₃垂熔漏斗抽滤，用60℃pH 4的水洗涤3～5次，而后用甲醇一甲酸搅浑溶液洗涤3～5次(含赤藓红的样品用液一液调配法解决)。再用水洗至中性，用乙醇-氨水-水搅浑溶液解吸3～5次，每一次5mL，收集解吸液，加乙酸中以及，蒸发至近干，加水消融，定容至5mL。经滤膜(O.45μm)过滤，取10μL进功能液相色谱仪。

②液-液调配法(适用于含赤藓红的样品)：将制备好的样品溶液放入分液漏斗中，加2mL盐酸、三正辛胺正丁醇溶液(5％)10～20mL，振摇提取，分取有机相，重复提取，直到有机相无色，并吞有机相，用饱以及硫酸铵溶液洗两次，每一次10mL，分取有机相，放蒸发皿中，水浴加热稀释至10mL，转移至分液漏斗中，加60mL正己烷混匀，加氨水提取2～3次，每一次5mL，并吞氨水溶液层(含水溶性酸性色素)，用正己烷洗两次，氨水层加乙酸调成中性，水浴加热蒸发至近干，加水定容至5mL。经滤膜(0.45μm)过滤，取10μL进功能液相色谱仪。

(3)功能液相色谱参考条件

①色谱柱：YWG-C_l810μm不锈钢柱4.6妹妹(内径)×250妹妹。

②行动相：甲醇-O.02m01/L乙酸铵溶液(pH 4)。

③梯度洗脱：甲醇20％～35％，5min；35％～98％，5min；98％不断6min。

④流速：1mL/min。

⑤紫外检测器：254nm波长。

(4)测定:取相同体积样液以及分解着色剂规范运用液分说注入功能液相色谱仪，依据保存光阴定性，外标峰面积法定量。

五、服从合计式中：

X_i——样品中着色剂的含量，g/kg；

C_i——样液中着色剂的品质，μg；

V₂——进样体积，mL；

V₁——样品稀释总体积，mL；

m——样品质量，g。

六、诠释

①最小检出量：新红5ng，柠檬黄4ng，苋菜红6ng，胭脂红26ng。

②应承相对于误差≤10％。

③样品不含赤藓红时，用聚酰胺吸附法；含赤藓红时，用液-液调配法

④测定一个样品后，将甲醇行动相复原至20％，使之晃动20min后，再开始测定第二个样品。

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相干链接：苋菜红，蛊惑红，柠檬黄，亮蓝