劲骨胶囊成果成份分说及其盐酸氨基葡萄糖含量测定（五）

D₃同样是劲骨胶囊及脂溶性维生素以及微囊化产物，在样品中含量更低（0.5～1.0μg/g）。成果成份中国药典二部对于D₃化学纯品，分说用HPLC正相色谱、盐酸红外妨碍分说。氨基借鉴Jiao等对于牛奶中痕量维生素D用石墨烯磁性固相萃取柱纯化富集样品，葡萄HPLC法别离测定及GB5009.82-2016维生素D₃的糖含HPLC测定的方式妨碍优化改善。样品用稀氨水超声突破囊壁以及无水乙醇消融，量测再用正己烷提取后正相色谱别离分说。劲骨胶囊及省去了石墨烯固相萃取柱纯化样品及国标法中皂化、成果成份煤油醚提取、分说洗涤及真空去世板等啰嗦步骤。盐酸方式的氨基检测限为7ng/g，适宜分说要求。葡萄经合成，糖含上述2种HPLC法亦能实用地证实样品中着实存在维生素K₁以及D₃。

六、盐酸氨基葡萄糖的含量测定方式

（1）色谱别离图

在分说劲骨胶囊配方中所有的成果成份后，详尽称取胶囊内容物20mg，于三角瓶中，先加1mL乙腈使样品潮湿散漫，再加过多水超声提取5min，掏出，放至室温，转移至25mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，作为样品溶液；详尽称取盐酸氨基葡萄糖比力品10mg，于25mL容量瓶中，先加1mL乙腈潮湿散漫，用水定容至刻度，摇匀，制成400μg/mL比力品溶液的方式对于其最主要的成果成份盐酸氨基葡萄糖妨碍了含量测定。服从呈现，比力品及样品色谱峰均达到基线别离，主峰惟独1个，保存光阴不同，峰形狭隘对于称，无杂峰干扰，适宜定量要求，如图9所示。同时此方式动相用乙腈-0.4%（mL/mL）磷酸（三乙胺调至pH3.0）（4:96，V:V）替换乙腈-离子对于试剂，可普及色谱柱的运用寿命，削减管道窒息，使测定愈加啰嗦快捷。

（2）方式学验证

①线性回归方程、关连系数、线性畛域、方式检测限及定量限

盐酸氨基葡萄糖在96～1200μg/mL畛域内呈线性关连，线性方程为Y=778.82X+6774.80，关连系数r2=0.9999，按样品最低浓度测出的信噪比3:1判断方式的检测限为1.2μg/mL，按信噪比10:1判断方式的定量限为3.8μg/mL。

呈直线回归，相干性好，线性畛域宽，方式检测限以及定量限低。

②样品测定方式详尽度试验

选定样品某一最适浓度，重复测定6次，相对于规范偏差为0.72%，诠释本方式重现性好，详尽度高。

③样品接管率试验

在线性畛域内接管加标接管的方式妨碍测定。选定已经知浓度样品作为本底，以其浓度为1，按低、中、高，即0.5:一、1:一、1.5:1左右浓度的比力品退出本底中，每一个浓度重复3次，共9个样品。经由供试品中含量值、比力品退出量以及测定值合计接管率以及RSD。经测定合计，服从见表1，低浓度平均接管率为99.78%，RSD为0.22%；中浓度平均接管率为100.40%，RSD为0.17%；高浓度平均接管率为100.01%，RSD为0.49%，具备较高的精确性。
 

七、样品中盐酸氨基葡萄糖含量的测定

在方式学验证根基上，对于陆续3批劲骨胶囊中盐酸氨基葡萄糖的含量遏制定量测定，产物各批含量根基不同，RSD为0.48%，如表2所示。诠释产品质量晃动，测定服从重复性好、灵便度以及精确度较高。

四、论断与品评辩说

本钻研建树了患上意骨胶囊成果成份的分说方式，在盐酸氨基葡萄糖的薄层色谱分说中，削减了样品用煤油醚脱脂纯化步骤，并在睁开剂中退出茚三酮显色剂，使睁开以及显色同时妨碍，取患上较好的成果。在白芍提取物的分说中，削减了样品用正丁醇纯化样品步骤，使样品能很好别离芍药苷，同时在薄层中妄想了比力提取物、比力药材、比力品多个参照物，比药典仅用1个参照物分说成果更具压倒力以及可信度。在维生素K₁以及D₃的HPLC法分说中，样品微囊破壁以及提取同步妨碍，比国家规范以及相干文献有较大改善，简化了良多啰嗦操作步骤，节约光阴，节约试剂，普及分说成果。同时本文对于HPLC法测定盐酸氨基葡萄糖含量妨碍了优化，抉择通用的C18反相柱以及紫外检测器，接管啰嗦的提取方式，优化行动相的组成、比例以及pH值，普及了测定详尽度以及精确度。上述分说以及含量测定方式专属性强、重现性好、灵便度高，可管控产品质量。

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