同步荧光法测定蔬菜中维生素E含量

维生素E作为一种人造抗氧化剂，同步具备翦灭体内从容基、荧光连结细胞膜的法测残缺以及个别功能以及防御脂质过氧化等心理功能，蔬菜是定蔬人体摄入维生素E的主要源头，测定蔬菜中维生素E的菜中含量，对于评估它的维生营养品质具备紧张意思。

测定维生素E的含量方式主要有比色法、薄层法、同步荧光法、荧光气相法、法测功能液相色谱法等，定蔬比色法操作比照重大，菜中但灵便度较低;功能液相色谱法分说率高，维生但操作重大，含量老本高，同步对于大批量样品测定比照难题;荧光法特同性强，干扰少，灵便，快捷，啰嗦，对于测定大批量蔬菜中的维生素E是一种比照事实的方式。但平凡荧光光谱法存在萃取剂煤油醚对于维生素E有干扰，使测定服从精确性低的弱点。本试验品评辩说了接管同步荧光光谱法测定蔬菜中维生素E，该方式消除了煤油醚的干扰，普及了试验的精确性。

1试验全副

1,1试剂与仪器

维生素E(Sigma公司，进口分装)，历时未经进一步纯化，溶于无水乙醇。其余试剂均为国产合成纯，所用溶液均用二次去离子水别致配制。

日立F-4500型荧光分光光度计(日今日立公司)。

1,2样品的制备与光谱测定

维生素E接管周松的方式提取。排汇未必量的维生素E提取液于20mL棕色带塞试管中，退出5.0mL合成纯煤油醚振荡1min，静置分层后(若有乳化征兆，加少许无水乙醇)，用注射器移去下层，下层煤油醚分说用蒸馏水洗涤2～3次牢靠激发波长λex=295nm，在λem=300～500nm扫描维生素E平凡荧光光谱;牢靠Δλ=30nm，λex=200～400nm下，测定同步荧光光谱，记实其λex=295nm处的荧光值。

2服从与品评辩说

2,1维生素E的激发光谱以及荧光光谱

用含维生素E2.0mg/L的规范乙醇溶液作校对于光谱一再试验表明，维生素E的激发光谱以及发射光谱均为λex295nm/λem327nm，服从见图1以及图2，与项光华、李艳飞等人的报道适宜。

2,2煤油醚以及维生素E的荧光光谱、同步荧光光谱

遵照试验方式，扫描煤油醚以及维生素E(10.0mg/L)的荧光光谱以及同步荧光光谱并妨碍比照，服从发现，溶剂以及维生素E在λem=327nm处荧光发射光谱相互重叠(图3)。从两者的同步荧光光谱可能看出，同步荧光法使2种物资分说在λ=250nm以及λ=290nm处有最大发射(Δλ=30nm)，从而消除了煤油醚对于维生素E测定的影响(图4)。

2,3区别Δλ对于维生素E同步荧光光谱的影响

接管同步荧光法测定蔬菜中的维生素E时，光谱形态不光与物资本性无关，且与Δλ无关，Δλ越小，组成的同步光谱峰数越小、峰形越窄，但Δλ不能过小，惟独当Δλ与发射峰、激发峰之间的波长相立室时，能耐产生比照强的荧光信号。2峰的别离状态个别用别离度R呈现，当R<1时，2峰有全副重叠;R≥1时，呈现2峰能清晰别离，知足合成要求;R=1.5时，呈现2峰能残缺别离。

本试验分说测定了Δλ为十、20、30、40、50nm时维生素E以及溶剂的同步荧光光谱，从图5以及表1可能看出，Δλ为十、20、30nm时，随着Δλ的削减，同步荧光的荧光强度逐步增强且三者R>1，综合图5以及表1，Δλ=30nm时，维生素E的同步荧光光谱的荧光强度最大，且可能与溶剂的荧光光谱分分开，因此在实际测定入抉择了Δλ为30nm。

         
2,4线性畛域

将维生素E规范液配制成区别品质浓度的系列溶液，按上述测定方式妨碍测定，服从表明，其品质浓度在0.01～10mg/L内与其荧光强度成线性关连(图6)，回归方程为I=16.173ρ+1.1235，I为荧光强度，ρ为品质浓度，关连系数r=0.9995，检出限为0.0025mg/L。

2,5接管试验

取划一品质的油菜样品，分说退出未必量的维生素E的规范溶液，按上述测定方式分说妨碍解决、测定，合计样品中维生素E的接管率(表2)。从表2可能看出，接管率为101.18%～101.58%，平均接管率为101.37%。

2,6实际样品的测定

用上述的试验方式测定实际样品中维生素E的含量，测定服从见表3，从表3可能看出，相对于规范偏差为2.4%，1.17%，诠释试验的重复性较好，试验服从比照患上意。

3小结

经由荧光光谱学对于蔬菜中维生素E含量钻研表明，以煤油醚作萃取剂时，平凡荧光光谱法不可以消除了萃取剂对于维生素E的干扰，接管同步荧光光谱法，当Δλ=30nm时维生素E的荧光强度最强，且能消除了萃取剂煤油醚的干扰浸染。而且在0.1～10mg/L内荧光强度以及维生素E浓度呈线性关连，回归方程为I=16.17ρ+1.1235，关连系数r=0.9995，样品的平均接管率为101.37%，实际样品测定服从的相对于偏差(RSD)<5，0%，该法操作啰嗦，快捷，精确性高，重复性好，对于大批量测定蔬菜中维生素E不失为一种事实的方式。

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