栀子油中藏红花酸的提取及其HPLC法测定钻研（一）

为实现栀子油中紧张活性物资藏红花酸的栀油中藏精判断量，选取超声辅助液液萃取以及固相萃取2种前解决方式妨碍系统品评辩说，红花重点审核了溶油试剂、法测料液比、定钻萃取试剂种类、栀油中藏萃取试剂浓度、红花液液萃取光阴、法测液液萃取温度以及液液萃取次数等因素。定钻

在2种前解决方式的栀油中藏最优条件下，超声辅助液液萃取取患上的红花藏红花酸含量高于固相萃取，且超声辅助液液萃取操作重大、法测耗时短、定钻能耗低。栀油中藏因此，红花最优前解决条件判断为：超声辅助液液萃取，法测以N，N-二甲基甲酰胺（DMF）为溶油试剂，料液比为0.5 g油：5 mL DMF，100%甲醇为萃取试剂，室温超声2 min，萃取1次，检测到的栀子油中藏红花酸含量的平均值为69.65 μg/g（RSD=4.45%）。

在此根基上，对于菜籽油妨碍加标接管试验，平均加标接管率为86.61%（RSD=1.16%），呈现了方式的可行性以及晃动性。该试验建树的方式可用于栀子油中藏红花酸的HPLC快捷、精判断量检测。

藏红花酸化学式为C20H24O4，属于类胡萝卜素。藏红花酸是贵重的药用资源，在防御血汗管疾病方面具备未必成果，经由增强脂质以及胆固醇的渗透，防治高血脂以及动脉粥样软化。此外，藏红花酸还具备防御阿尔茨海默病、削减皮肤伤害、抗烦闷、呵护肝脏、抗肿瘤等浸染。

当初，大多将藏红花作为获取藏红花酸的源头，而藏红花价格高尚，是意大利、土耳其、伊朗等地种植的一种木本动物。栀子具备多种生物活性，是除了藏红花之外，仅有含有藏红花酸的动物。藏红花在我国少有种植，而栀子相对于自制、适应性强、种植成活率高，是原产于我国的紧张木本动物资源之一。

藏红花酸含量是栀子品质的紧张评估指标之一。当初，对于栀子中藏红花酸含量的检测方式已经有一些报道，如：张永利等接管酶解法将栀子果中的藏红花素转化为藏红花酸，并用紫外分光光度法妨碍检测。陈雁等接管HPLC法检测栀子果中的藏红花酸以及藏红花素。栀子果具备20%～25%的可食用脂肪，可加工成栀子油，相似山茶油以及橄榄油等产物，属于国家反对于、倡导的大瘦弱新型木本动物油。

CAI X等经由HPLC-DAD/ESI-MS发现栀子油中含有藏红花酸。食用油中的微量活性营养物资是评估食用油品质的紧张指标。而藏红花酸作为一种栀子油特有的功能性成份，也答应以作为评估栀子油营养品质的紧张参考指标。GB 509.149—2016《食物牢靠国家规范 食物中栀子黄的测定》中波及到液体中藏红花酸的合成方式，将酱油等液体用甲醇消融后间接进样检测，但该法并不适用于动物油。

因为动物油不能消融在甲醇中，以是油料需先经由溶油试剂解决，再用有机溶剂萃取其中的藏红花酸。因此，若何实用溶油并功能提取、检测其中的藏红花酸是方式的重点地址，现阶段，动物油中藏红花酸的定量检测方式未见报道。

超声辅助液液萃取法是一种传统的样品别离技术。该方式无需过剩仪器，耗时短、功能高，但对于样品的别离纯化可能不够残缺。如：刘金铭等接管超声辅助液液萃取提取食物中的活性成份。

固相萃取法对于样品的传染成果更好，可能着落样品基质干扰，普及检测灵便度，但固相萃取SPE小柱价格较高。如：陈坤等接管C18固相萃取柱对于食用油传染，检测其中的乙基麦芽酚。

文章系统比照了2种前解决技术，筛选患上到了栀子油中藏红花酸的最优提取方式，建树了栀子油中藏红花酸的HPLC快捷、精判断量检测方式，为栀子中藏红花酸的钻研奠基了方式学根基，对于栀子瘦弱功能油的开辟及品质评估提供了紧张工具。

1 资料与方式

1.1 试剂与仪器

藏红花酸规范品（纯度≥98%）；Methyl Alcohol（HPLC级）、Acetonitrile（HPLC级）；乙醇、甲醇、异丙醇、乙腈、乙酸、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）、煤油醚、氯仿；正己烷、吡啶；CNWBOND Diol二醇基固相萃取SPE小柱；栀子油：浙江骄栀科技有限公司；原香菜籽油：金太阳粮油股份有限公司。

BAS224S合终日平，DS-2510DTH超声波洗涤器，D-37520超速离神思，SHB-Ⅲ-A循环水式多用真空泵，Essentia LC-16岛津功能液相色谱仪。

1.2 试验方式

1.2.1 规范样品蕴藏液的制备

藏红花酸规范品蕴藏液的制备：精确称取0.60 mg（精确至0.1 mg）藏红花酸规范品，用吡啶消融残缺后，退出甲醇（色谱级）并转移到50 mL容量瓶中，混匀，定容，取患上12 μg/mL的藏红花酸规范蕴藏液。

1.2.2 HPLC色谱条件

色谱柱为反相柱子Kinetex 5u XB C18（250 妹妹×4.6 妹妹，5 μm，Phenomenex）。色谱条件参照GB 509.149—2016《食物牢靠国家规范 食物中栀子黄的测定》：行动相为乙酸-乙酸铵缓冲溶液（A）-乙腈（B）；洗脱梯度：0.0～1.0 min，20%B；1.10～8.0 min，20%～60%B；8.0～8.1 min，60%～70%B；8.10～13.0 min，70%～98%B；13.10～15.0 min，98%～20%B；15.10～20.0 min，20% B；流速为1.0 mL/min；进样量为10 μL；柱温为35 ℃。

1.2.3 超声辅助液液萃取

1.2.3.1 溶油试剂种类及料液比

称取0.5 g栀子油于烧杯中，分说退出5 mL正己烷、DMF、煤油醚、氯仿溶油。待油液全副消融后，退出10 mL 100%的甲醇，常温条件，赶快超声2 min。超声后，经8000 r/min离心10 min，分层后排汇有机相，用甲醇定容到25 mL容量瓶中。分说取2 mL样液，经0.45 μm尼龙66滤膜过滤后，妨碍液相合成。抉择好溶油试剂之后，再对于料液比妨碍优化：即分说退出2.五、五、7.五、十、12.5 mL DMF。

1.2.3.2 萃取试剂种类及浓度

称取0.5 g栀子油于烧杯中，退出5 mL DMF，待油液全副消融后，分说退出10 mL浓度100%的乙酸、乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇，赶快超声2 min，超声后经8000 r/min离心10 min，分层后排汇有机相，甲醇定容到25 mL的容量瓶中。分说取2 mL样液，经0.45 μm尼龙66滤膜过滤后，妨碍液相合成。抉择好萃取试剂之后，再对于萃取试剂浓度妨碍优化：即分说退出浓度70%、80%、90%、100%的甲醇。

1.2.3.3 温度实光阴对于提取栀子油中藏红花酸的影响

称取0.5 g栀子油于烧杯中，退出5 mL DMF，待油液全副消融后，退出10 mL浓度100%的甲醇，连结光阴2 min巩固，分说在30、60、90 ℃条件下妨碍前解决，而后经8000 r/min离心10 min，分层后排汇有机相，甲醇定容到25 mL的容量瓶中。分说取2 mL样液，经0.45 μm尼龙66滤膜过滤后，妨碍液相合成。光阴条件为：30 ℃时，分说在二、十二、2二、32 min条件下妨碍前解决。

1.2.3.4 萃取次数

判断溶油试剂、料液比、萃取试剂种类及浓度、超声温度以及光阴等因素后，对于萃取次数妨碍优化：称取0.5 g栀子油于烧杯中，退出5 mL DMF，待油样全副消融后，退出10 mL 100%的甲醇，赶快超声2 min，超声后经8000 r/min离心10 min，分层后排汇有机相，甲醇定容到50 mL的容量瓶中，取患上萃取1次的样品；称取0.5 g栀子油于烧杯中，退出5 mL DMF，待油样全副消融后，退出10 mL 100%的甲醇，赶快超声2 min，超声后经8000 r/min离心10 min，分层后排汇有机相到50 mL容量瓶中。

再次往离心后的油相中退出5 mL DMF，待油样全副消融后，退出10 mL 100%的甲醇，赶快超声2 min，超声后经8000 r/min离心10 min，分层后排汇第二次的有机相到部署于第一次有机相的50 mL的容量瓶中，并用甲醇定容。此为提取2次的样品。同理可患上，提取3次的样品。分说取2 mL样液，经0.45 μm尼龙66滤膜过滤后，妨碍液相合成。

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相干链接：N-二甲基甲酰胺，异丙醇，乙酸