栀子油中藏红花酸的提取及其HPLC法测定钻研（二）

1.2.4 前解决方式

接管固相萃取法。栀油中藏

1.2.4.1 溶油试剂种类及料液比

称取0.5 g栀子油于烧杯中 ，红花分说退出5 mL正己烷、法测DMF、定钻煤油醚、栀油中藏氯仿，红花将油残缺消融。法测活化：分说陆续用5 mL甲醇以及5 mL正己烷过二醇基SPE小柱。定钻上样：将油溶液过柱，栀油中藏此时待测物保存在固相上。红花用5 mL正己烷润洗烧杯2次，法测并将润洗液过柱。定钻

淋洗：先用6 mL正己烷分2次洗涤，栀油中藏再用4 mL正己烷-乙酸乙酯（90：10）过柱。红花洗脱：最后用10 mL 100%的法测甲醇洗柱子。收集洗脱液，用甲醇定容到25 mL容量瓶中。分说取2 mL样液，经0.45 μm尼龙66滤膜过滤后，妨碍液相合成。抉择好溶油试剂之后，再对于料液比妨碍优化：分说退出2.五、五、7.五、十、12.5 mL的正己烷。

1.2.4.2 洗脱剂种类及浓度

固相萃取的洗脱剂种类抉择及洗脱剂浓度优化方式，参照超声辅助液液萃取中的萃取试剂种类及浓度方式妨碍。

2 服从与品评辩说

2.1 藏红花酸的规范曲线

精确排汇藏红花酸规范蕴藏液0.0五、0.一、0.二、0.五、1.0 mL于10 mL容量瓶中，用甲醇定容，混匀，过膜，10 μL进样，分说测定其在440 nm检测波长的峰面积。以藏红花酸的浓度C为横坐标、该检测波长下测患上的峰面积A为纵坐标，取患上藏红花酸的规范曲线。服从表明，在上述浓度畛域内线性优异，回归方程y=115356x—26489，R2=0.9996，按S/N=3合计，患上到检出限为0.21 μg/mL，按S/N=10合计，患上到定量限为0.7 μg/mL。

2.2 区别溶油试剂对于提取栀子油中藏红花酸的影响

首先，在预试验中，无论是超声辅助液液萃取仍是固相萃取都泛起了一个配合征兆，即煤油醚以及氯仿尽管都能溶油，但在液相检测时不藏红花酸的信号峰。正己烷、煤油醚、氯仿以及DMF的极性排序为：DMF>氯仿>煤油醚>正己烷。这表明溶油试剂极性的巨细并非决定栀子油中藏红花酸提取功能的仅有因素，详尽原因有待进一步钻研。因此抉择正己烷以及DMF[18]妨碍后续试验。对于超声辅助液液萃取，正己烷以及DMF都有溶油成果，服从如图1所示，藏红花酸的出峰光阴都在14.1 min左近，峰形优异且与周围杂峰都能较好别离。

此外，以DMF为溶油试剂患上到的藏红花酸的信号峰比用正己烷患上到的更高。经换算，用DMF消融栀子油，检测患上到的藏红花酸含量平均值为69.65 μg/g，比用正己烷为溶油试剂时取患上的平均值（60.67 μg/g）逾越8.98 μg/g。因此，对于超声辅助液液萃取，DMF为最优溶油试剂。

试验未对于固相萃取SPE小柱的填料妨碍优化，而是间接抉择了二醇基SPE小柱。这是因为：首先经由预尝试试探区别SPE填料的检测成果（C1八、硅胶、二醇基），发现二醇基的检测成果远远优于其余资料。其次，经由查阅文献，丁明等接管固相萃取测定茶油中总酚，比照差此外固相萃取小柱（C1八、硅胶、弗罗里硅土以及二醇基），服从发现二醇基SPE小柱最佳;罗凡等接管固相萃取/功能液相色谱法测定茶油中的多种人造酚类物资，间接接管了二醇基SPE小柱。

而藏红花酸以及酚酸的性子相似，均为极性化合物，意料其SPE的最优填料也为二醇基。综合思考，试验中未对于固相萃取的填料规范妨碍优化，而是间接选用了最优填料。对于固相萃取，试验服从表明：以DMF为溶油试剂，在洗脱液中检测不到藏红花酸的信号峰;以正己烷为溶油试剂时，可能检测到藏红花酸。这是因为，运用DMF为溶油试剂时，洗脱液的色调简直为透明，二醇基填料由原有的红色酿成黄色，藏红花酸为黄色，以是它被少许吸附在二醇基填料中，简直不被洗脱下来。

判断其原因，可能是因为二醇基以及DMF的极性都很强，两者之间具备强烈的相互浸染，经由DMF消融的栀子油，其中的藏红花酸与二醇基的相互浸染变强，甚至于不能被甲醇洗脱下来，液相上检测不到信号峰。因此，固相萃取抉择正己烷为溶油试剂。

2.3 料液比对于提取栀子油中藏红花酸的影响

超声辅助液液萃取的试验服从表明：随DMF体浸逐步削减，溶液逐步污浊，7.5 mL及其以上的溶液澄澈度很低，不具备透光性。DMF体积在12.5 mL时，溶液离心后不分层。因此，DMF体积为7.五、10 mL以及12.5 mL的样品不能妨碍液相合成。对于2.5 mL DMF以及5 mL DMF的栀子油萃取物妨碍液相合成，服从如图2所示：5 mL DMF时藏红花酸浓度平均值为69.65 μg/g，高于2.5 mL DMF时藏红花酸浓度平均值为59.93 μg/g。因此，在超声辅助液液萃取条件下，最优料液比抉择0.5 g油：5 mL DMF。

如图3所示，固相萃取的服从表明：当料液比为油：正己烷=0.5 g：5 mL时，固相萃取患上到藏红花酸浓度最高，为61.27 μg/g。

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