响应面法优化超声辅助提取桦剥管菌多糖及其抗氧化活性钻研（一）

桦剥管菌隶属于真菌门、响应性钻担子菌亚门、面法层菌纲、优化研非褶菌目、超声多孔菌科、辅助剥管菌属，桦剥化活又称为桦多孔菌、管菌桦滴孔菌或者桦孔菌，多糖是抗氧桦木属树木专有性木腐菌。其形态特色：籽实体中大型(最大直径可达30cm)，响应性钻无柄或者简直无柄，面法上部为扁半球形，优化研下部为扁平形，超声愿望早期为污白褐色，辅助前期为褐色。桦剥化活外表有一层褐色的薄薄的表皮，撕去后可呈现红色的菌肉，边缘内卷(图1，照片由延边中原桑黄菌业有限公司提供)。菌肉很丰硕，近肉质且口感滑嫩，经由晾晒脱水后，菌肉会成为较轻的革质状。桦剥管菌扩散区域宽泛，陕西、福建、安徽、黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古、甘肃、四川、云南、贵州、新疆、西藏、河南、湖南等区域。

桦剥管菌既是可能功能地降解木质纤维素的褐腐菌，也是一种适用真菌与药用真菌。桦剥管菌多糖是桦剥管菌的主要活性成份之一，具备消炎、抑菌的功能，同时，桦剥管菌多糖具备“二抗浸染”，即抗病毒以及抗癌浸染。当初，国内外对于桦剥管菌的降解木料能耐以及提取物的钻研较多，而无关钻研以及运用桦剥管菌多糖的报道较少，桦剥管菌为一年生真菌，产量高且在我国储量充实，本钻研以桦剥管菌籽实体干品为试验资料，接管响应面法优化桦剥管菌多糖超声辅助提取工艺，经由单因素试验以及Box-Behnken(BBS)试验，判断桦剥管菌多糖最佳提取工艺条件，并对于其妨碍抗氧化活性钻研，以期为桦剥管菌的开辟、钻研与运用提供迷信的事实依据。

一、资料与方式

一、资料与试剂

桦剥管菌籽实体干品，2017年11月购于延边中原桑黄菌业有限公司。

葡萄糖、苯酚、浓硫酸、硫酸亚铁、水杨酸、H20二、抗坏血酸(VC)、1-1-二苯基-2-苦肼基(DPPH)、95％乙醇，以上试剂均为份子纯。

二、仪器与配置装备部署

试验所用仪器、配置装备部署如表1所示。

三、方式

（1）桦剥管菌多糖的提取工艺流程

桦剥管茵籽实体干品→烘干至恒品质→桦剥管茵粉→取19桦剥管茵粉加水份配液料比→水浴提取→超声波解决→离心→稀释100倍→苯酚→硫酸法显色→490nm测定吸光值。

（2）葡萄糖规范曲线的绘制

详尽称取105℃、4h烘干至恒重的葡萄糖50mg定容于500mL容量瓶中，配成0.1mg/mL的葡萄糖规范溶液。分说详尽移取葡萄糖规范溶液0、0.二、0.四、0.六、0.八、lmL于大试管中，补加蒸馏水至1.0mL。分说详尽移取上述葡萄糖溶液1mL，分说加6％苯酚溶液0.5mL，浓硫酸2.5mL，震撼摇匀，室温部署10min后于490nm测定吸光值。

（3）桦剥管菌多糖含量及患上率的测定

接管苯酚-硫酸法妨碍桦剥管菌多糖含量的测定。精确排汇样品溶液lmL于试管中，分说加6％苯酚溶液0.5mL，浓硫酸2.5mL，震撼摇匀，室温部署10min后于490nm测定吸光值。依据测患上的吸光值带入规范曲线回归方程，合计患上桦剥管菌多糖浓度。再将多糖浓度带入如下公式，合计桦剥管菌多糖患上率：

桦剥管菌籽实体多糖患上率(％)=C×V×n/m×100％，其中，C是测患上吸光度对于应的浓度；V是提取液总体积；n是稀释的倍数；m是桦剥管菌籽实体粉末品质。

（4）桦剥管菌多糖提取单因素试验

按工艺流程方式提取桦剥管菌多糖，抉择水浴温度、超声温度、超声光阴、超声功率、液料比妨碍单因素试验，以桦剥管菌多糖患上率为钻研指标，审核各个因素对于桦剥管菌多糖患上率的影响。区别因素梯度条件见表2。

（5）超声波辅提桦剥管菌多糖工艺的Box-Behnken响应面试验妄想

基于单因素试验服从，抉择水浴温度(A)、超声功率(B)、料液比(C)为自变量，桦剥管菌多糖患上率(Y)为响应值，运用Design—Expert.V8.0.6软件的Box-Behnken(BBD)试验道理妄想3因素3水平响应面试验，对于超声波辅提桦剥管菌多糖的工艺条件妨碍优化。试验因素及水平妄想表，见表3。

（6）羟基从容基翦灭力测定

依据H₂O₂与Fe²⁺浸染产生羟基从容基，并使水杨酸显色的方式测定羟基从容基翦灭能耐。参照林琳的试验方式并做适量更正。分说精确配制0.125mg/mL、0.25mg/mL、0.5mg/mL、1.0mg/mL、2.0mg/mL、4.0mg/mL、8mg/mL样品多糖溶液，挨次在试管中退出1.0mL的FeSO。溶液(9妹妹ol/L)，1.0mL的区别浓度的桦剥管菌多糖溶液，1.0mL的H202溶液(0.03％)以及1.0mL的水杨酸溶液(9妹妹ol/L)。将反映液置于37℃水浴30min，在510nm处测定各反映液的吸光值。空缺组的多糖溶液由蒸馏水替换。比力组用划一浓度的VC溶液替换多糖溶液。遵照下式合计羟基从容基的翦灭率。

羟基从容基翦灭率(％)=(Ao-A)/Ao×100％，其中，Ao：空缺组的吸光值；A：样品组的吸光值。

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相干链接：二苯基-2-苦肼基，硫酸亚铁，水杨酸，苯酚