R.oryzaeMG1发酵对于姜油树脂抗氧化活性的影响（三）

四、酵对R.oryraeMG1发酵姜油树脂条件的于姜油树氧化响应面合成

（1）响应面模子建树及方差合成

依据单因素试验的服从，抉择姜油树脂削减量、脂抗发酵温度以及发酵光阴用BBD挨次妄想三因素三水的活性平响应面优化妄想，共17次试验，酵对服从见表1。于姜油树氧化多元回归拟合患上到的脂抗二阶多项回归方程模子为：

Y=-4917.80206+50.60680X₁+248.91550X₂+462.95900X₃+0.077975X₁X₂+0.38

830X₁X₃-3.54325X₂X₃-0.37321X₁²-3.60654X₂²-44.66781X₃²，可呈现经R.oryzaeMGI发酵后姜油树脂总抗氧化活性(Y)与姜油削减量(X₁)、活性发酵温度(X₂)、酵对发酵光阴(X₃)的于姜油树氧化分割。

方差合私见表2，脂抗回归效应清晰(p＜0.05)，活性诠释方程模子置信度高于95%；失拟项不清晰(p＞0.05)，酵对诠释方程模子人造误差不清晰，于姜油树氧化拟合度好；复关连系数R²=0.9917，脂抗诠释方程模子与试验数据的适宜度可达99.17%；调整性决定系数AdjR²=0.9811，诠释方程模子可信度高。基于上述合成，回归方程模子可能用来预料因素(X₁、X₂以及X₃)与响应值(Y)的关连。

每一个因素以及各因素互交浸染对于试验服从的线性效应的影响是否清晰以p值呈现，p值越小影响越清晰(p＜0.05)。由表2可见，X₁、X₂对于发酵后姜油树脂的TAC影响清晰，X₃对于发酵后姜油树脂的TAC影响不清晰；X₁²、X₂²、X₃²对于发酵后姜油树脂的TAC影响极清晰；X₁X₂、X₁X₃、X₂X₃互交对于发酵后姜油树脂的TAC影响均不清晰。由此可知，试验各因素对于MG1发酵后姜油树脂的总抗氧化活性影响的清晰水平为:姜油树脂削减量＞发酵温度＞发酵光阴。

由图8可见，姜油树脂削减量与发酵光阴、发酵温度与光阴之间交互浸染清晰，姜油树脂削减量与发酵温度之间交互浸染不清晰，与响应面方差合成(表2)服从适宜。响应面3D模子见图8，随姜油树脂削减量削减，发酵后姜油树脂的TAC先削减后着落；随温度的着落，TAC同样先削减后着落；随发酵光阴缩短，TAC先飞快削减，而后趋于笔陡，与单因素试验服从适宜合。等高线的形态反映了各因素交互效应的强弱，椭圆形的离心率越挨近1呈现两因素交互浸染越清晰。由图8可见，姜油树脂削减量与发酵光阴、姜油树脂削减量与发酵温度、发酵温度与光阴之间交互浸染均不清晰，与响应面方差合成(表2)服从适宜。

经软件合成计，R.oryzae算MG1发酵姜油树脂的最佳模拟条件为:在20mLPDA液体作育基中削减姜油树脂73.47μL，33.25C震撼(150r/min)作育4.18d，在此条件下总抗氧化活性预料值可达2046.94umol/g。

（2）模子的验证

为了验证R.oryzaeMG1发酵姜油树脂抗氧化功能条件的坚贞性，在模拟预料条件的根基上，依据实际状态，为不便操作试验操作条件以削减误差，最终判断的R.oryzaeMG1发酵姜油树脂条件为70μL的姜油树脂削减量，33℃下震撼(150r/min)作育4d。三次重复试验的总抗氧化活性平均为2025.44土5.01μmolg，试验值与事实预料值无清晰性差距，拟合性较好，表明此模子是实用的，可用于预料MGI发酵姜油树脂的实际试验状态，具备未必的事实参考价格。在此条件下MG1发酵姜油树脂作育物的总抗氧化活性比比力组普及了69.15士1.01%，比优化行普及了7.17+0.91%，如图9所示。

五、姜油树脂活性成份功能液相色谱合成

发酵实现后，将作育基真空去世板后用甲醇超声萃取，取过多用0.22μm的尼龙膜过滤进样，进样体积10μL，检测波长280nm，行动相为乙腈以及1%的冰醋酸，流速1.0mL/min，柱温48℃，运行光阴62min，妨碍梯度洗脱。

积分服从如图10所示，姜油树脂中约有14种物资，经R.oryzaeMG1发酵后，以1号物资(6-姜酚)为参照，假如在其峰面积至关的状态下，2号物资(8-姜酚)的峰面积比发酵前削减了0.17倍，3号物资(6-姜烯酚)的峰面积比发酵前削减了0.37倍，4号物资(10-姜酚)的峰面积比发酵前削减了0.22倍，15号物资峰面积比发酵前削减了0.69倍；十一、十二、14号物资缺失；6号物资(10-姜烯酚)峰面积简直巩固；7号物资峰面积比发酵行普及了4.60倍，8号物资峰面积比发酵行普及了1.03倍，9号物资峰面积比发酵行普及了3.34倍、10号物资峰面积比发酵行普及了5.56倍，13号物资峰面积比发酵行普及了3.10倍；泛起了5号(8-姜烯酚)1六、1七、18号物资。

诠释经由R.oryzaeMG1的发酵，姜油树脂发酵提取物中的成份全副发生了转化，已经知的五种物资相对于含量着落，不光使其余物资含量着落，还天生为了新物资，总抗氧化活性较高随之普及。后续试验需进一步将新检测出的物资别离纯化，妨碍结构判断。

三、论断

本文经由对于5株根霉发酵姜油树脂的抗氧化活性妨碍比照，R.oryzaeMG1呈现出较强的发酵能耐，抗氧化活性最高，且发酵液气息更舒畅，辛辣的气息削弱，有淡淡的柠檬香味。再以单因素及响应面方式优化患上到了R.oryzaeMGI的最佳发酵条件，即在20mLPDA液体作育基中接种1%的MG1胞子悬液，姜油树脂削减量70uL，33℃下震撼(150r/min)作育4d，发酵后姜油树脂的抗氧化活性比发酵行普及了69.15士1.01%；经功能液相色谱合成，姜油树脂的R.oryzaeMG1发酵提取物中的成份发生了转化，且天生为了4种新物资。由此可诠释，R.oryzaeMG1的发酵对于姜油树脂的抗氧化活性的降职及风韵改善有未必的成果，可能据此钻研开辟高附加值的生姜风韵发酵食物。

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