份子蒸馏纯化花生油甘油二酯及其成份变换钻研（一）

甘油二酯（DAG）是份蒸份变指甘油中两个羟基与脂肪酸发生酯化反映患上到的产物，是馏纯一种功能性油脂，它分为1,化花换钻3-甘油二酯以及1,2-甘油二酯两种异构体。钻研表明其具备削减内脏脂肪的生油积攒、操作体重、甘油着落血脂等成果。酯及甘油二酯可宽泛运用于食物、其成药品、份蒸份变化装品等。馏纯相干于化学法，化花换钻酶法制备甘油二酯具备反映系统条件以及顺，生油产物纯度较高，甘油能耗高档劣势。酯及以花生油为质料，其成斲丧花生油甘油二酯，份蒸份变不光风韵特意，而且质料充实，适于工业化斲丧。

当初报道份子蒸馏是别离甘油酯的最实用的技术，该技术主要有蒸馏温度低、使命真空度高、物料受热光阴短以及别离成果好等短处，适用于高沸点、热敏性及易氧化物料的别离。近多少年，油脂中的缩水甘油酯以及反式脂肪酸受到国内外钻研者的关注。缩水甘油酯对于人体具备致癌性，以前日本花王公司斲丧了“Econa瘦弱烹调油”，但随后检测机构在其中检测出缩水甘油酯含量超标，致使该产物不能在市场上销售。钻研表明缩水甘油酯组成的历程与其前体物资无关，并将前体物资演绎为单酰基甘油酯、二酰基甘油酯、三酰基甘油酯以及氯。油脂在精辟脱臭历程中，高温处剖析使反式脂肪酸含量削减。油脂中还存在维生素E、动物甾醇等有利成份，在分解及纯化历程中会有未必的损失。当初未有对于份子蒸馏后花生油甘油二酯有利与有害成份的钻研。本试验经由火子蒸馏纯化花生油甘油二酯，钻研分解与纯化前、后的甘油酯组成、脂肪酸组成、缩水甘油酯（GEs）及营养物资的变换。这对于增强操作油脂开辟类食物的品质牢靠，以及油脂行业的发展以及人们的身段瘦弱具备紧张的迷信钻研意思。

1资料与方式

1.1资料与试剂

鲁花一级花生油，南昌天虹超市；脂肪酸标品（GLC463标样），NuChek.Prep公司；丙三醇、无水硫酸钠、冰乙酸、氯化钠等均为合成纯级试剂；正己烷、甲醇、叔丁基甲醚、异丙醇、苯硼酸等为色谱纯级试剂。Novozym435脂肪酶，诺维信（中国）生物技术有限公司；3-氯-1,2-丙二酵（3-MCPD-d₅），加拿大TorontoResearchChemicals公司。

1.2仪器与配置装备部署

FA2204B电子天平，上海精科天美迷信仪器有限公司；TDL-5-A低速大容量离神思，上海安亭迷信仪器厂；UIC-KDL1份子蒸馏，德国UIC公司；DSY-VI型氮吹仪，北京金科精髓苑科技有限公司；DF101S集热式恒温加热磁力搅拌锅，郑州市亚荣仪器有限公司；RE-2000A旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵，巩义市予华仪器有限责任公司；6890N型气相色谱仪，美国Agilent公司；HH-4型数显恒温水浴锅，国华电器有限公司等。

1.3试验方式

1.3.1酶解法斲丧甘油二酯

运用Novozym435脂肪酶在无溶剂系统下经由甘油解反映制备甘油二酯，分解条件为：花生油与甘油物资的量比1∶2，加酶量6%，反映光阴12h，反映温度70℃。反映结束后将反映系统妨碍离心，别离反映系统中的脂肪酶后，分解产物高温贮存。

1.3.2份子蒸馏工艺钻研

接管两级份子蒸馏从分解产物搅浑物中别离以及纯化甘油二酯。首先，妨碍一级份子蒸馏将产物系统中的脂肪酸、甘油一酯在较高温度下与酰基甘油搅浑物别离，一级份子蒸馏条件：蒸馏温度180℃以及200℃，冷凝温度20℃，转速200r/min，真空度0.1Pa，进料速率2mL/min，而后经由二级份子蒸馏在200℃温度以上从甘油三酯中别离出甘油二酯，审核二级份子蒸馏温度对于甘油二酯纯度以及患上率的影响。

1.3.3甘油酯纯度测定

接管正相功能液相色谱法测定。测定条件：检测器：蒸发光散射检测器（Model300S，美国Softa公司）；色谱柱：HypersilBDSCPS(5μm,250妹妹×4.6妹妹，美国Thermo公司）；柱温：30℃；流速：1.0mL/min；样品质量浓度：0.2mg/mL正己烷；行动相：正己烷（溶有0.4%的乙酸）以及叔丁基甲醚（溶有0.4%乙酸）。接管梯度洗脱，洗脱挨次：0～5min,100%正己烷；5～15min,100%～20%正己烷；15～17min,20%正己烷；17～17.1min,20%～100%正己烷；17.1～20min,100%正己烷。某种甘油酯的含量呈现为该种甘油酯的峰面积占总的甘油酯峰面积的百分比。

甘油二酯的纯度界说为

式中，MAG（%）———产物中甘油一酯含量；DAG（%）———产物中甘油二酯含量；TAG（%）———产物中甘油三酯含量；FFA（%）———产物中游离脂肪酸的含量。

1.3.4理化性子测定

酸价接管GB5009.229-2016测定；过氧化值接管GB5009.227-2016测定；光华接管GB/T22460-2008动动物油脂罗维朋光华的测定。

1.3.5甘油三酯总脂肪酸组成合成

甘油三酯的脂肪酸组成参照本试验碱法甲基化方式：取2mg甘油三酯，溶于1.5mL正己烷，退出40μL乙酸甲酯以及100μL(0.5mol/L）甲醇钠溶液，涡流混匀1min,37℃下反映20min后，置于冰箱下层-20℃冷冻10min，掏出后赶快退出60μL草酸溶液，离心弃去积淀，N₂吹干，GC合成甘油三酯脂肪酸组成。

1.3.6气相色谱合成

色谱条件参照Cruz-Hernandez，色谱柱为CP-Sil88熔融石英毛细管柱（100m×0.25妹妹×0.2μm）。载气为H₂，焚烧气为H₂、N₂以及空气。FID温度250℃，进样口温度250℃。气相色谱挨次升温的光阴为86min:45℃连结4min，以13℃/min的升温速率将温度升至175℃，连结27min后再以4℃/min的升温速率升至215℃，连结35min。脂肪酸的合成参照规范图谱，脂肪酸的百分含量接管面积归一化法判断（以峰值面积的百分比呈现）。

1.3.7缩水甘油酯的测定

样品解决：称取2份油样0.1g于100μL甲基叔丁基醚中，再向油样中退出1μg3-MCPD-d5，分说符号为A,B，涡旋振荡两支试管至油样残缺消融。再向溶液中退出25g/L甲醇钠的甲醇溶液200μL，涡旋1min。酯替换反映的光阴要操作在3.5～5.5min内，不断涡旋直至反映液廓清，试管A中退出600μL酸化的氯化钠溶液（200g/L），试管B中退出600μL酸化的溴化钠溶液（600g/L）妨碍酯替换反映。短缺反映后，两支试管中再分说退出600μL的正己烷溶液，盖上盖子短缺涡旋后离心5min(4000r/min），待反映液分层后去除了有机层。此步骤重复3次。衍生反映：对于A,B试管，分说用600μL乙醚/乙酸乙酯搅浑溶剂（3∶2）反萃取其水相，短缺涡旋后离心5min(4000r/min），待溶液分层后把有机相并吞在装有大批无水硫酸钠的2mL离心管中，此步骤重复3次。再分说向有机相中退出200μL衍生化试剂（PBA溶于乙醚中饱以及），短缺涡旋后在30℃下反映20min。纯化复溶：衍生化反映结束后，用悭吝流氮气吹干，氮吹温度为45℃。氮吹完后，退出500μL异辛烷复溶，短缺涡旋后离心1min(6000r/min），取200μL下层清液转移至GC瓶中，供GC-MS合成。气相色谱测定条件：不分流进样，进样体积1μL，载气为He,1.2mL/min恒速行动；升温挨次为60℃，以6℃/min回升至130℃，连结8min，再以20℃/min回升至250℃并连结5min。质谱条件：EI+,SIM模式；EI离子源温度230℃，EI电离能量70eV；接口温度280℃；溶剂延迟6min；抉择3-MCPD-d5m/z为201,150;3-MCPDm/z为196,147定性定量。

1.3.8甾醇的测定

精确称取0.05～0.1g（精确至0.1mg）的样品置于带盖的试管中，退出5.0mL2mol/L氢氧化钾的乙醇溶液后加盖密封，猛烈振摇30s，置于60℃水浴中皂化1h，并连结振摇，用水冷却至室温后退出1.0mL二次水以及4.0mL正己烷，密封后猛烈振摇，静置，将下层（正己烷层）转移至另一试管中，用N2吹干正己烷后退出1mL甲醇消融，用0.45μm微孔滤膜滤过并转至进样瓶中，在试验设定条件下妨碍HPLC测定。液相色谱合成条件参见江海、冯妹元等以及牟德华等的方式，并在此根基上作少许改动，接管二极管阵列检测器（DAD），条件如下：色谱柱：HypersilODS2-C18(5μm,4.6妹妹150妹妹）行动相：纯甲醇。流速：1.0mL/min。检测波长：210nm。柱温：30℃。进样量：10L。合成时长：20min。

1.3.9维生素E的测定

称取未必量VE标品，记实下品质，用正己烷定容。再日后中挨次分说精确移取0.5,1,2,3,4,6mL，稀释至10mL。接管HPLC合成，每一个样品平行测3次，绘制规范曲线。样品预解决：精确称取1g菜籽油于10mL棕色容量瓶中，正己烷定容。经0.45μm有机膜过滤落伍样。

色谱柱：依利特HypersilODS2(5μm,4.6妹妹×150妹妹），行动相为甲醇：水（体积比98∶2），进样5μL，流速配置为0.8mL/min，紫外检测波长：λex=295nm，柱温：25℃。

1.4统计方式

用SPSS20.0对于数据妨碍合成以及图表绘制，检测服从用Mean±SD呈现；一着实施均重复3次以上，而且用单因素方差合成比照均值，P<0.05为清晰性差距。

2服从与合成

2.1分解及份子蒸馏前、后甘油酯组成液相色谱图

图1分说为搅浑甘油酯规范品、分解甘油酯及份子蒸馏一次以及二次的液相图谱，横坐标为光阴，纵坐标为响应信号，出峰挨次挨次为FFA、TAG、1,3-DAG、1,2-DAG以及MAG，别离成果很好。份子蒸馏一次后可作废游离脂肪酸以及甘油一酯。份子蒸馏二次后可只保存甘油二酯组分。

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相干链接：甘油二酯，丙三醇，正己烷