柚皮苷二氢查尔酮的抗氧化活性钻研（三）

2.3 柚皮苷、柚皮研NaringinDC、苷氢NHDC及槲皮素对于铁离子的抗氧复原浸染

钻研了柚皮苷、NariNgiNDC、化活NHDC及槲皮素4种样品对于铁离子的性钻复原浸染，以VC为比力，柚皮研以其浓度-吸光值绘制规范曲线y=0.0006x+0.0943（R²=0.9998），苷氢4种样品对于铁离子的抗氧复原浸染以VC的至关复原能耐时的用量呈现，服从如表5所示。化活

由表5可看出，性钻4种样品对于三价铁离子均有复原浸染。柚皮研以维生素C为比力，苷氢柚皮苷的抗氧VC抗氧化物资的量为66.48μMoL/g，NariNgiNDC为72.67μMoL/g，化活NHDC为339.63μMoL/g，性钻槲皮素为32751.11μMoL/g。4种样品对于铁离子复原能耐挨次为槲皮素＞NHDC＞NariNgiNDC＞柚皮苷。

2.4 柚皮苷、NaringinDC、NHDC及槲皮素对于氧从容基的翦灭成果

以TroLox为比力，以其浓度-吸光值绘制规范曲线y=0.0398x+92.858（R2=0.99），钻研柚皮苷、NariNgiNDC、NHDC及槲皮素4种样品对于氧从容基的翦灭成果，服从见图6。遵照1.2.4节方式统计样品各浓度的AUC值，4种样品对于氧从容基翦灭成果以TroLox的抗氧化物资的量呈现，服从见表6。

由表6可知，4种样品翦灭氧从容基浸染排序为槲皮素＞NariNgiNDC＞NHDC＞柚皮苷，柚皮苷的抗氧化性远小于2种二氢查尔酮，诠释在柚皮苷加氢历程中结构发生改动，加氢产物的抗氧化性普及。

2.5 NaringinDC与人铜锌超氧化物比方化酶SOD对于接服从

为了从份子水平诠释槲皮素与人铜锌超氧化物比方化酶的浸染模式，将槲皮素对于接至铜锌超氧化物比方化酶的活性口袋。槲皮素与铜锌超氧化物比方化酶的散漫模式如图7a所示，由图7可能看出，槲皮素份子位于一个由氨基酸残基A/Leu10六、A/Cys-1十一、A/iLe-11三、A/iLe-15一、B/Cys-111以及B/iLe-113组成的疏水性腔袋，组成晃动的疏水性相互浸染。详尽合成可患上出：槲皮素的苯环可与氨基酸残基B/Arg-115组成阳离子-π相互浸染。紧张的是，槲皮素的羟基可与氨基酸残基A/GLy108构愿望为2.7A的氢键浸染。所有这些相互浸染使患上槲皮素与铜锌超氧化物比方化酶组成晃动的复合物。

为进一步诠释NariNgiNDC与铜锌超氧化物比方化酶的散漫模式，将NariNgiNDC对于接至铜锌超氧化物比方化酶的活性口袋，服从如图7b所示。NariNgiNDC位于一个由氨基酸残基A/Leu-10六、A/Cys-1十一、A/iLe-11三、A/iLe-15一、A/iLe-1十二、B/Leu-10六、B/ALa-一、B/iLe-11三、B/Cys-111以及B/iLe151所组成的疏水性腔袋，并组成强烈的疏水性相互浸染。合成可知，NariNgiNDC的最后苯环可与氨基酸残基B/Arg-115组成阳离子-π相互浸染。紧张的是，NariNgiNDC可分说与氨基酸残基A/Leu-10六、A/GLy-10八、A/Cys-111构愿望为2.3，2.1A以及2.6A的三重氢键浸染。所有这些相互浸染使患上NariNgiNDC与铜锌超氧化物比方化酶组成晃动的复合物。

此外，槲皮素以及NariNgiNDC与人铜锌超氧化物比方化酶的散漫能分说为-28.4512kJ/MoL以及-29.288kJ/MoL。此服从表明槲皮素以及NariNgiNDC可能为铜锌超氧化物比方化酶的抑制剂，且NariNgiNDC的活性优于槲皮素。

总之，上述份子对于接钻研对于化合物槲皮素以及NariNgiNDC与人铜锌超氧化物比方化酶的相互浸染给以公平的批注，为从份子水平批注其相互浸染提供了新思路。

2.6柚皮苷、NaringinDC、NHDC及熊果苷对于酪氨酸酶的抑制作用

柚皮苷、NariNgiNDC、NHDC及熊果苷4种样品对于酪氨酸酶的抑制作用如图8所示。依据区别品质浓度的百般品对于酪氨酸酶的抑制率，接管对于数方程拟合，患上到拟合曲线如表7所示。依据拟合方程合计患上到iC₅₀值。

依据表7可看出，4种样品对于酪氨酸酶均有抑制作用。由柚皮苷对于酪氨酸酶抑制作用的拟合曲线合计患上到iC₅₀=33.58Mg/ML；由NariNgiNDC拟合曲线合计患上到iC₅₀=13.22Mg/ML；由NHDC拟合曲线合计患上到iC₅₀=13.79Mg/ML；由熊果苷拟合曲线合计患上到iC₅₀=13.09Mg/ML。比照它们的iC₅₀可能看出：4者对于酪氨酸酶抑制能耐排序为NHDC＞熊果苷≥NariNgiNDC＞柚皮苷。

2.7 NaringinDC与双孢蘑菇酪氨酸酶的份子对于接服从

为从份子水平诠释熊果苷与双孢蘑菇酪氨酸酶的浸染模式，将熊果苷对于接至酪氨酸酶的活性口袋。熊果苷与酪氨酸酶的散漫模式如图9a所示。

由图9可看出，熊果苷份子位于一个由氨基酸残基VaL-24八、Phe-26四、MeT-280、VaL-283以及ALa-286所组成的疏水性腔袋，组成晃动的疏水性浸染。合成可知，熊果苷苯环上的4位羟基可与氨基酸残基His-263构愿望为2.6A的氢键浸染。所有这些相互浸染使熊果苷与酪氨酸酶组成晃动的复合物。为进一步诠释NariNgiNDC与酪氨酸酶的散漫模式，将NariNgiNDC对于接至酪氨酸酶的活性口袋，服从如图9b所示。NariNgiNDC份子位于一个由氨基酸残基Phe-26四、Pro-27七、MeT280、VaL-28三、Pro-284以及ALa-286所组成的疏水性腔袋，并组成强烈的疏水性浸染。合成可知，NariNgiNDC的最后苯环可分说与氨基酸残基Phe-264以及His-263组成π-π聚积浸染以及CH-π相互浸染。紧张的是，NariNgiNDC可分说与氨基酸残基His-244以及MeT-280构愿望为2.6A以及2.0A的双重氢键浸染。所有这些相互浸染使NariNgiNDC与酪氨酸酶组成晃动的复合物。

此外，熊果苷以及NariNgiNDC与双孢蘑菇酪氨酸酶的散漫能分说为-25.104kJ/MoL以及-27.6144kJ/MoL，判断熊果苷以及NariNgiNDC均可能为酪氨酸酶的抑制剂，且NariNgiNDC的活性优于熊果苷。

总之，上述份子对于接钻研对于化合物熊果苷以及NariNgiNDC与双孢蘑菇酪氨酸酶的相互浸染给以公平的批注，为从份子水平批注其相互浸染提供新思路。

2.8 小鼠玄色素瘤B16细胞MTT试验服从

由图10可看出，NariNgiNDC、柚皮苷以及熊果苷在500μMoL/L及如下浓度，由B16细胞MTT试验测患上的细胞存活率均大于90%，诠释NariNgiNDC、柚皮苷以及熊果苷在500μMoL/L及如下浓度是B16细胞的牢靠浓度。

2.9 B16玄色素瘤细胞Hoechst荧光染色试验服从

由图11可看出，在浓度500μMoL/L条件，柚皮苷组、NariNgiNDC组以及熊果苷组与空缺组比力，细胞密度与数目相近，表明细胞不凋亡，因此500μMoL/L是药物组的牢靠浓度。

3 论断

运用4种罕有的抗氧化以及份子对于接方式钻研了柚皮苷二氢查尔酮的抗氧化活性，经由测定酪氨酸酶活性钻研了其美白活性，经由MTT试验测定了其细胞毒性，所患上论断：柚皮苷二氢查尔酮具备较好的抗氧化性以及美白活性，对于小鼠玄色素瘤B16细胞的牢靠浓度为≤500μMoL/L。

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