灰树花（Grifolafrondosa）一种贵重的天麻退出态药食用真菌，以籽实体或者菌丝体作为食用全副，灰树花固活性具备多种活性功能，酵对如：抗氧化、于基降血糖、质主降血脂、成份抗肿瘤、天麻退出态翦灭重金属，灰树花固活性而且含有较为充实的酵对生物活性物资，如，于基灰树花多糖、质主多酚、成份甾醇类、天麻退出态萜类等活性成份。灰树花固活性传统灰树花固态作育主若是酵对运用木屑、稻草以及农作物副产物作为愿望基质，灰树花采收后，菌糠则被扔掉，造成很大的资源浪费及情景传染。

开辟一种新型的灰树花愿望基质，并残缺运用其发酵基质具备很高的钻研价格。经由前期的试验将已经优化的苦荞、薏仁米等种种基质的比例作为灰树花发酵基质妨碍试验。苦荞作为西南区域一种药食同源谷物富含黄酮类物资，其芦丁含量极高，薏仁米复含薏仁酯、薏仁素以及充实的淀粉物资，两者可能作为灰树花发酵基质，为灰树花的愿望提供碳氮源。

天麻（Rhizomagastrodiae）一种贵重中药，复含天麻素（p-hydroxymethylphenyl-β-D-glucopyranoside，GA）、对于羟基苯甲醇（p-hydroxybenzylalcohol，HA）、对于羟基苯甲醛（p-hydroxylbenzaldehyde，HBA）、巴利森苷，具备很高的药理成果。课题组前期试验验证了削减未必比例的天麻提取物退出灰树花液态深层发酵可能清晰地增长灰树花胞外多糖的渗透及生物量的削减以及分解运用天麻成份妨碍生物转化。将中药天麻以区别比例的削减量退出灰树花的固态发酵，进一步充实以及拓展中药资源与食用菌共发酵以及两者之间相互影响、生物转化的钻研远景以及中药菌质产物的食药价格。

1资料与方式

1.1资料与试剂

灰树花（Grifolafrondosa，菌种编号：5.404）；天麻，贵州感动慷慨详尽；苦荞，贵州威宁；薏仁米，贵州兴仁；天麻素比力品、对于羟基苯甲醇比力品、对于羟基苯甲醛比力品、巴利森苷比力品、芦丁比力品、异槲皮苷比力品；无水硝酸铝、亚硝酸钠；其余试剂均为市售合成纯

斜面作育基为马铃薯葡萄糖琼脂（potatodextroseagar，PDA）作育基

1.2仪器与配置装备部署

BXM-30R型立式灭菌锅；SW-CJ-1D型传染使命台；TGL-20M型台式高速冷冻离神思；CTFD-12S型真空冷冻去世板机；恒温作育箱；Agilent1100型功能液相色谱仪及检测器、Agilent5TC-C18型色谱柱

1.3试验方式

1.3.1灰树花固态发酵作育基配制流程呈现图

1.3.2灰树花菌种作育方式

1.3.2.1斜面种子作育

从母种试管中挑取黄豆粒巨细菌丝块接种于PDA作育皿中部，25℃恒温作育，至菌丝长满全部斜面，转置4℃保存。

1.3.2.2发酵作育

作育基成份组成：苦荞粉：4.5g；苦荞皮：1.5g；薏仁米：1.5g；麸皮：0.4g；葡萄糖：0.1g；

天麻粉：天麻烘干，超微破碎捣毁机打碎终日麻粉，过60目筛。分说遵照作育基品质分数的0、10%、20%、30%、40%、50%退出到发酵作育基中退出固态发酵。

将上述资料混匀加水，置于灭菌锅中灭菌（121℃、30min），作育基着落到室温，接入灰树花菌种于作育基中，放入恒温恒湿作育箱中妨碍愿望发酵12d（25℃）

1.3.3发酵基质的解决

发酵基质在恒温恒湿作育箱中作育12d后，将其妨碍真空冷冻去世板，去世板之后的发酵物超微破碎捣毁并过80目筛，收集粉末，置于-20℃条件下保存，作为试验资料。

1.4合成方式

1.4.1总黄酮含量的测定

精确称取0.4g菌粉，退出20mL50%的乙醇中，常温摇晃提取1h，8000r/min离心10min，取上清液，作为待测样品溶液。接管NaNO二、Al（NO3）3显色法丈量，总黄酮含量以芦丁当量呈现。

1.4.2天麻素、对于羟基苯甲醇、对于羟基苯甲醛、巴利森苷含量的测定

1.4.2.1色谱条件

色谱柱：Agilent5TC-C18型色谱柱（250妹妹×4.6妹妹，5µm）；洗脱挨次：0~35min（0%~30%B），35~40min（30%~100%B），40~45min（100%~3%B）；行动相：0.1%的磷酸水（D）、乙腈（B）；流速：1mL/min；检测波长：221nm；柱温：30℃

1.4.2.2样品溶液的配制

精确称取0.5g发酵粉末，退出10mL75%乙醇，常温浸提12h，8000r/min离心10min，取上清液，作为待测样品溶液，遵照上述功能液相色谱法（highperformanceliquidchromatography，HPLC）条件妨碍天麻素、对于羟基苯甲醇、对于羟基苯甲醛、巴利森苷含量的测定，将种种物资的峰面积代入规范曲线，患上到种种物资的含量。

1.4.3芦丁、异槲皮苷含量的测定

1.4.3.1色谱条件

行动相：0.02%的磷酸水、乙腈；流速：1mL/min；检测波长：360nm；柱温：30℃；等度洗脱：V（乙腈）∶V（0.02%磷酸水）=20∶80

1.4.3.2样品溶液的配制

精确称取0.5g发酵粉末，退出10mL甲醇，常温浸提12h，8000r/min离心10min，取上清液，作为待测样品溶液，遵照上述HPLC条件妨碍芦丁、异槲皮苷含量的测定，将种种物资的峰面积分说代入规范曲线，患上到种种物资的含量。

1.5数据解决与合成

所有的数据运用Origin10软件绘图，运用SPSS19.0软件妨碍数据合成。试验数据以平均值±规范偏差（m±SD）呈现（n=3），运用单因素方差合成（ANOVA）以及配对于t-魔难妨碍清晰性合成，P<0.05呈现数据具备清晰性差距。

2服从与合成

2.1灰树花固态发酵区别光阴形态及表不雅结构的变换

图1为灰树花在未削减天麻作育基上愿望变换。在愿望7d时，灰树花菌丝体根基铺满作育基，且菌丝色调亮白，散漫致密，诠释灰树花可能在基质上妨碍个别的愿望，此种作育基未对于灰树花的愿望产生抑制作用。

图2为发酵组以及未发酵组在区别天数时菌质的表不雅形态图。由图2可知，在发酵组，随着灰树花发酵光阴的缩短，基质结构产生少许细微的孔隙，在发酵尽头时，基质由外到内均产生了较大的孔隙，结构近乎崩解，比照于发酵组，未发酵组基质在0~12d的表不雅结构形态均未发生清晰的变换，结构均较为残缺致密。

比力两者基质的表不雅结构，诠释经灰树花发酵，对于基质结构产生了清晰的崩解浸染，经由对于基质结构的破损，使患上基质的营养物资更重大析出，削减了菌丝体与基质的打仗面积，有利于菌丝体更好地罗以至用营养物资提供自身的愿望代谢。

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