柱前衍生法检测香菇酱中甲醛（二）

1.2.4 试验条件的柱前中甲优化

检测样品，量取1 mL的衍生10 μg/mL甲醛规范溶液于盛有10 mL衍生液的50 mL具塞离心管中，配置衍生情景pH分说为2,法检3,4,5,6,衍生温度为60 ℃,衍生光阴为60 min, 审核区别pH对于甲醛以及样品衍生的影响。

检测样品，测香量取1 mL的菇酱10 μg/mL甲醛规范溶液于盛有10 mL衍生液的50 mL具塞离心管中，配置衍生情景温度分说为25,柱前中甲40,60,80 ℃,衍生pH为2～5,衍生光阴为60 min, 审核区别温度对于甲醛以及样品衍生的影响，以峰面积来呈现。衍生

1.2.5 试验方式的法检验证

接管率：精确称量匀浆样品10.00 g, 削减3个梯度的甲醛规范溶液(10,15,20 μg/mL)1 mL至样品中，静置5 min,测香 遵照本试验建树的检测方式妨碍接管率的验证，遵照2.2.2的菇酱方式操作。

详尽度：经由合计单日内每一隔2 h陆续3次丈量10 μg/mL甲醛规范溶液。柱前中甲

方式的衍生线性畛域：遵照上述操作条件及色谱条件，每一个浓度点平行丈量3次，法检丈量取患上的测香峰面积以平均值带入线性畛域合计。

检测限及定量限：经由陆续稀释试验取患上定量极限(LOQ),菇酱并依据10∶1的信噪比(S/N)妨碍估算；检出限(LOD)由3∶1的信噪比(S/N)估算，是可经由该方式检测到或者与空缺基质的布景噪声分说开的最低合成物浓度。

2 服从与品评辩说

2.1 试验条件的优化

香菇酱作为香菇的加工废品，是一种公共乐见餐桌上的调味酱，可是因为香菇作为香菇酱的主要原资料之一，其甲醛含量偏高,甲醛对于皮肤以及黏膜具备强烈的鼓舞浸染。香菇在加工收藏历程中仍是含有甲醛残留,如高温导致的美拉德反映;加工历程会影响香菇自身代谢从而产生甲醛;包装会有甲醛的迁徙或者传染等。

功能液相色谱法具备检测限高档劣势，基于此，开收回一种适应香菇酱特色的晃动坚贞的甲醛检测方式。

1 资料与方式

.1 试剂与仪器

1.1.1 试剂

甲醛规范溶液(100 mg/L)、乙腈(色谱纯)、2,4-二硝基苯肼(色谱纯)、硫酸铵(合成纯)、冰醋酸(合成纯):麦克林试剂有限公司；醋酸钠(合成纯):天津市大茂化学试剂厂。

1.1.2 仪器

Waters 2695功能液相色谱仪(配紫外检测器) Waters 公司；合终日平 赛多利斯迷信仪器(北京)有限公司；THZ-82A超级恒温水浴振荡器 常州澳华仪器有限公司；3K15高速台式离神思 Sigma 离神思(扬州)有限公司；pH计 上海详尽仪器仪表有限公司。

1.2 试验方式

1.2.1 样品解决

将样品短缺匀浆，精确称取样品10.00 g, 置于50 mL具塞塑料离心管中，精确退出20 mL衍生缓冲液，盖紧盖子，涡旋混匀后置于60 ℃,150 r/min水浴锅中，振摇1 h, 而后冷却至室温。退出5 g硫酸铵，涡旋混匀，以8000 r/min离心10 min后，移取上清液于具塞试管中，下层溶液用10.0 mL乙腈重复萃取1次，离心，并吞上清液，用乙腈定容至20.0 mL,混匀，过0.22 μm微孔滤膜，待HPLC检测。

1.2.2 甲醛规范溶液的制备

分说排汇0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5 mL的甲醛规范溶液，加衍生缓冲液定容至20 mL,配制成0,0.5,1,1.5,2,2.5 μg/mL的规范溶液，盖紧盖子，涡旋混匀后置于60 ℃,150 r/min水浴锅中，振摇1 h, 而后冷却至室温，过0.22 μm微孔滤膜，待HPLC检测，以甲醛的品质浓度作为横坐标(X),以峰面积为纵坐标(Y),绘制甲醛溶液规范曲线。

1.2.3 色谱条件

参考色谱条件并加以改善，色谱柱：Agilent TC-C18(250 妹妹×4.6 妹妹, 5 μm);柱温25 ℃;紫外检测器；检测波长352 nm; 行动相：乙腈-水(70∶30,V/V),进样量10 μL;流速1 mL/min, 等度洗脱。

1.2.4 试验条件的优化

检测样品，量取1 mL的10 μg/mL甲醛规范溶液于盛有10 mL衍生液的50 mL具塞离心管中，配置衍生情景pH分说为2,3,4,5,6,衍生温度为60 ℃,衍生光阴为60 min, 审核区别pH对于甲醛以及样品衍生的影响。

检测样品，量取1 mL的10 μg/mL甲醛规范溶液于盛有10 mL衍生液的50 mL具塞离心管中，配置衍生情景温度分说为25,40,60,80 ℃,衍生pH为2～5,衍生光阴为60 min, 审核区别温度对于甲醛以及样品衍生的影响，以峰面积来呈现。

1.2.5 试验方式的验证

接管率：精确称量匀浆样品10.00 g, 削减3个梯度的甲醛规范溶液(10,15,20 μg/mL)1 mL至样品中，静置5 min, 遵照本试验建树的检测方式妨碍接管率的验证，遵照2.2.2的方式操作。

详尽度：经由合计单日内每一隔2 h陆续3次丈量10 μg/mL甲醛规范溶液。

方式的线性畛域：遵照上述操作条件及色谱条件，每一个浓度点平行丈量3次，丈量取患上的峰面积以平均值带入线性畛域合计。

检测限及定量限：经由陆续稀释试验取患上定量极限(LOQ),并依据10∶1的信噪比(S/N)妨碍估算；检出限(LOD)由3∶1的信噪比(S/N)估算，是可经由该方式检测到或者与空缺基质的布景噪声分说开的最低合成物浓度。

2 服从与品评辩说

2.1 试验条件的优化

2.1.1 液相图

由图1可知，甲醛的保存光阴为5 min。

2.1.2 衍生pH的优化

由图2可知，在酸性条件下，增强了正电性，有利于2,4-二硝基苯肼的攻击，组成2,4-二硝基苯腙,以是当pH为6时，衍失成果较差。由图2中A可知，甲醛在pH为4时衍失成果最佳，其中pH为2以及3时，衍失成果平凡，主若是因为过酸的条件下在色谱柱上吸附成果较差。由图2中B可知，在区别pH的条件下溶出差此外物资，可是这些物资的变换主要会集在4 min从前，不影响对于甲醛-2,4-二硝基苯腙的定量。因此，抉择pH 4～5作为反映系统的最适pH,思考到样品为半固体，以是经由配制pH 3.6的醋酸盐缓冲溶液，调节提取液情景，经检测pH为4.61。

2.1.3 衍生温度

由图3中A可知，随着温度的着落，峰面浸逐步削减，而80 ℃时的峰面积最大，其源于在温度较高的状态下乙腈挥发降职待测溶液中2,4-二硝基苯肼的浓度导致峰面积削减。由图3中B可知，随着衍生温度的着落，会产生新的醛类物资，影响检测；而1 h内常温衍生难以衍生残缺，以是抉择40～60 ℃作为反映系统的最适衍生温度。

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