荜茇根化学成份及其抗肿瘤活性

指标钻研荜茇PiperlongumL.根的荜茇化学成份及其抗肿瘤活性。方式荜茇去世板根茎95%乙醇提取物接管硅胶、根化SephadexLH-20、学成重结晶妨碍别离纯化，份及依据理化性子及波谱数据判断所患上化合物的其抗结构。MTT法测定其中2种典型生物碱的肿瘤抗肿瘤活性。服从从中别离患上到10个化合物，活性分说判断为β-谷甾醇(1)、荜茇胡萝卜苷(2)、根化二十四烷酸(3)、学成十九烷酸(4)、份及荜茇酰胺(5)、其抗胡椒碱(6)、肿瘤胡椒内酰胺A(7)、活性胡椒内酰胺D(8)、荜茇N-异丁基-(2E,4E,12Z)-十八烷基-1-酰胺(9)、3,4-亚甲二氧基肉桂酸(10)。化合物5对于3株肿瘤细胞的IC50值均小于20μmol/L。论断化合物3～四、7～10为初次从该动物中别离患上到，化合物5对于3株肿瘤细胞呈现出清晰的细胞毒活性。

荜茇PiperlongumL.为胡椒科胡椒属药用动物,主要产于菲律宾、印尼，在我国云南有家养，具备温中散寒、下气止痛的成果，临床用于治疗胃腹冷痛、食欲不振、消化不良、肾寒、吐逆等症，蒙医、中医都用其果实入药，其温热之性可治疗中焦胃寒等症。维医区别于蒙、藏、中医，不是用荜茇果实，而是用其根茎，作为消化系统的罕用药材。

国内对于荜茇的钻研主要会集在果实化学成份、胡椒碱提取工艺及含量测定等方面，而对于荜茇根化学成份的报道较少。因此，本钻研对于荜茇根妨碍化学因素辩离及判断，从中患上到10个化合物，其中3～四、7～10为初次从该动物中别离患上到，5呈现出较突出的抗肿瘤活性。

1资料

B260旋转薄膜蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；XT5显微熔点测试仪(温度计未校对于，北京市科仪电光仪器厂)；核磁共振光谱用AvanceⅢ-400MHz核磁共振仪测定(TMS内标,瑞士Bruker公司)；ESI-MS谱用ImpactHDQ-TOF型质谱仪测定(瑞士Bruker公司)；柱层析硅胶(200～300目)、薄层层析硅胶G(青岛陆地化工有限公司)；SephadexLH-20(上海浩然生物技术有限公司)。煤油醚、乙酸乙酯、甲醇等试剂均为合成纯。荜茇根采自云南山区，经西北农林科技大学林学院康永祥传授判断为胡椒科胡椒属动物荜茇PiperlongumL.的根,阴干后破碎捣毁备用。

2提取与别离

荜茇根在室温下阴干称定品质，约4.5kg，破碎捣毁，退出95%乙醇，静置24h回流提取，重复3次，提取液过滤并吞，减压稀释患上到浸提物约470g。荜茇根的浸提物用硅胶拌样，经由硅胶柱色谱用煤油醚、乙酸乙酯、甲醇为洗脱剂妨碍洗脱，最终患上煤油醚部位24g、乙酸乙酯部位203g、甲醇部位232g。乙酸乙酯部位经硅胶柱层析，煤油醚-乙酸乙酯及乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱，患上到9个组分Fr.A1～A9，重复硅胶柱层析、SephadexLH-20凝胶柱别离，经薄层色谱检识、一再重结晶后，从Fr.A2患上到化合物1(465.8mg)、9(48.8mg)，从Fr.A3患上到化合物5(12mg)、6(8.59g)、8(20mg)、10(30mg)，从Fr.A4患上到化合物7(70.4mg)，从Fr.A5患上到化合物2(3.22g)。煤油醚部位经硅胶柱层析，油醚-乙酸乙酯及乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱，患上到9个组分Fr.B1～B9，从Fr.B2患上到化合物3(2.16g)，从Fr.B6患上到化合物4(30mg)。

3结构判断

化合物1:无色针状结晶(煤油醚),mp135～137℃。ESI-MSm/z:413[M-H]-,份子式C29H50O。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:5.36(1H,m,H-6),3.53(1H,m,H-3),0.69(3H,d,H-18),1.03(3H,s,H-19),0.93(3H,d,J=6.5Hz,H-21),0.86~0.78(9H,m,H-26,H-27,H-29)；13C-NMR(100MHz,CDCl3)δ:36.5(C-1),31.6(C-2),71.8(C-3),42.2(C-4),140.7(C-5),121.7(C-6),31.8(C-7),31.4(C-8),49.6(C-9),36.1(C-10),21.0(C-11),39.7(C-12),40.5(C-13),56.0(C-14),23.8(C-15),28.2(C-16),56.0(C-17),11.8(C-18),18.7(C-19),35.6(C-20),18.7(C-21),33.9(C-22),25.9(C-23),45.7(C-24),28.2(C-25),19.3(C-26),18.7(C-27),22.5(C-28),11.3(C-29)。以上数据与文献不同,故判断为β-谷甾醇。

化合物2:红色粉末,ESI-MSm/z:575[M-H]-,份子式C35H60O6,mp296～298℃。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:5.34(1H,m,H-6),4.90(1H,H-1′),4.44(2H,t,J=11.48Hz,H-6′),4.22(1H,d,J=7.72Hz,H-4′),3.64(1H,m,H-3),0.99(3H,H-21),0.96(3H,H-19),0.91(3H,d,J=6.32Hz,H-26),0.84(3H,H-29),0.80(3H,H-27),0.66(3H,s,H-18)；13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:140.3(C-5),121.1(C-6),100.7(C-1′),76.8(C-3),76.8(C-3′),76.7(C-5′),73.4(C-2′),70.0(C-4′),61.0(C-6′),56.1(C-14),55.3(C-17),49.5(C-9),45.0(C-24),41.8(C-13),40.2(C-12),38.2(C-4),36.7(C-20),36.1(C-1),35.4(C-10),33.3(C-22),31.3(C-7),31.3(C-8),29.2(C-2),28.6(C-25),27.7(C-16),25.3(C-23),23.8(C-15),22.5(C-28),20.5(C-11),19.7(C-26),19.0(C-19),18.8(C-21),18.5(C-27),11.7(C-18),11.6(C-29)。以上数据与文献不同,故判断为胡萝卜苷。

化合物3:红色粉末(煤油醚),ESI-MSm/z:367[M-H]-,mp52～54℃。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:0.89(3H,t,-CH3),1.27(40H,m),1.64(2H,m,-CH2),2.36(2H,t)；13C-NMR(100MHz,CDCl3)δ:179.7(C-1),33.5(C-2),26.3(C-3),23.1(C-23),13.6(C-24)。以上数据与文献不同,故判断为二十四烷酸。

化合物4:红色粉末(煤油醚),ESI-MSm/z:297[M-H]-。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:0.88(3H,t,-CH3),1.27(30H,m,H-4～13),1.64(2H,m,-CH2),2.37(2H,t)；13C-NMR(100MHz,CDCl3)δ:180.4(C-1),34.5(C-2),27.7(C-3),22.2(C-18),13.1(C-19)。以上数据与文献不同,故判断为十九烷酸。

化合物5:红色晶体(甲醇),ESI-MSm/z:316[M-H]-。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:6.04(1H,m,H-3),6.95(1H,m,H-4),2.48(2H,m,H-5′),4.03(2H,m,H-6),6.80(1H,s,H-2′,6′),7.66(1H,d,H-7′),7.69(1H,d,H-8′),3.90(3H,s,OCH3-3′,OCH3-5′),3.85(3H,OCH3-4′)；13C-NMR(100MHz,CDCl3)δ:166.3(C-2),126.3(C-3),145.9(C-4),25.2(C-5),42.1(C-6),131.1(C-1′),106.0(C-2′,C-6′),153.8(C-3′,C-5′),140.3(C-4′),144.3(C-7′),121.5(C-8′),169.3(C-9′),56.6(OCH3-3′,OCH3-5′),61.4(OCH3-4′)。以上数据与文献]不同,故判断为荜茇酰胺。

化合物6:无色方晶(甲醇),mp135～136℃。碘化铋钾反映阴性。ESI-MSm/z:284[M-H]-。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:6.44(1H,d,J=14.6Hz,H-2),7.40(1H,m,H-3),6.77(1H,m,H-4),6.74(1H,m,H-5),6.97(1H,d,J=1.4Hz,H-2′),6.77(1H,d,J=80Hz,H-5′),6.88(1H,dd,J=8.0,1.4Hz,H-6′),5.96(2H,s,-O-CN2-O-),3.55(2H,brs,H-1″),1.61(2H,m,H-2″),1.61(2H,m,H-3″),1.60(2H,m,H-4″),3.46(2H,brs,H-5″)；13C-NMR(100MHz,CDCl3)δ:165.3(C-1),120.0(C-2),142.4(C-3),125.3(C-4),138.1(C-5),130.9(C-1′),105.6(C-2′),148.1(C-3′),148.0(C-4′),108.4(C-5′),122.5(C-6′),101.3(-0-CH2-O),43.2(C-1″),26.7(C-2″),24.6(C-3″),25.6(C-4″),46.9(C-5″)。以上数据与文献不同,故判断为胡椒碱。

化合物7:黄色粉末,ESI-MSm/z:264[M-H]-。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:10.65(1H,brs,-NH),9.27(1H,m,H-5),7.94(1H,m,H-8),7.77(1H,s,H-2),7.53(2H,m,H-6,7),7.13(1H,s,H-9),4.05(3H,s,4-OCH3)；13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:57.7(3-OCH3),104.8(C-9),109.0(C-2),114.9(C-4a),116.2(C-1),124.8(C-11),125.4(C-7),127.3(C-6),127.2(C-8a),127.9(C-5),129.2(C-8),134.6(C-5a),135.6(C-10),148.8(C-4),150.1(C-3),169.4(C-12)。以上数据与文献不同,故判断为胡椒内酰胺A。

化合物8:黄色粉末,ESI-MSm/z:294[M-H]-。1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:3.93(3H,s,C3-OCH3),4.45(3H,s,C4-OCH3),7.26(1H,s,H-9),7.49(2H,m,H-6,H-7),7.88(1H,m,H-8),9.28(1H,m,H-5),9.82(1H,brs,NH)；13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:61.8(C3-OCH3),62.9(C4-OCH3),105.8(C-9),106.3(C-1),112.2(C-10a),125.6(C-7),126.7(C-6),127.2(C-4a),127.6(C-5a),127.8(C-5),129.2(C-8),134.2(C-9a),135.5(C-10),140.0(C-3),153.7(C-4),154.6(C-2),167.5(-C=O)。以上数据与文献不同,故判断为胡椒内酰胺D。

化合物9:油状物。ESI-MSm/z:332[M-H]-,份子式C22H39NO。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:5.53(1H,br,-NH),5.69(1H,d,J=14.8Hz,H-2),7.18(1H,dd,J=10Hz,H-3),6.11(1H,m,H-4),6.07(1H,m,H-5),2.17(2H,m,H-6),1.25～1.41(14H,m,H-7,8,9,10,15,16,17),2.01(2H,m,H-11),5.35(1H,m,H-12),5.34(1H,m,H-13),2.01(2H,m,H-14),0.89(3H,m,H-18),3.16(2H,t,J=6.4Hz,H-2′),1.68(1H,m,H-3′),0.92(6H,m,H-4,5′)；13C-NMR(100MHz,CDCl3)δ:166.4(C-1),121.7(C-2),143.2(C-3),128.3(C-4),141.3(C-5),33.0(C-6),28.9(C-7),29.4(C-8),29.6(C-9),29.3(C-10),26.1(C-11),129.5(C-12),129.6(C-13),27.3(C-14),29.4(C-15),32.0(C-16),22.7(C-17),14.1(C-18),46.9(C-2′),28.6(C-3′),20.5(C-4′,5′)。以上数据与文献不同,故判断为N-异丁基-(2E,4E,12Z)-十八烷基-1-酰胺。

化合物10:黄色粉末,ESI-MSm/z:191[M-H]-,份子式C10H8O4。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.59(1H,d,J=15.9Hz,3-H),6.96～6.76(3H,d,Ar-H),6.34(1H,d,J=15.9Hz,2-H),5.90(2H,s,-O-CH2-O-)；13C-NMR(100MHz,CDCl3)δ:179.7(C-1),33.5(C-2),31.4(C-3),29.2(C-4),29.2(C-5),29.1(C-6),29.1(C-7),28.9(C-8),28.8(C-9),28.5(C-10)。以上数据与文献不同,故判断为3,4-亚甲二氧基肉桂酸。

4抗肿瘤活性

选取3种罕有的肿瘤细胞株，对于化合物五、6妨碍抗肿瘤活性测试。取对于数生临时的人前线腺肿瘤细胞株PC三、人肺癌肿瘤细胞株A54九、人乳腺癌肿瘤细胞株MCF7，退出过多0.25%的胰卵白酶消化后，用DMEM作育液配成1×105/mL细胞悬液，在96孔细胞作育板中每一孔退出100μL，置于37℃、5%CO2恒温作育箱中作育24h后，吸去上清液，退出区别品质浓度的化合物，别为200、6七、2二、7.四、2.五、0μmol/L,作为试验组；退出100μL5%DMEM作育液，作为空缺组,每一组3孔，不断作育48h。试验结束前4h，每一孔退出20μLMTT(5mg/mL，用PBS缓冲液配置装备部署)，37℃不断作育4h，弃去上清液,退出100μL/孔DMSO,振荡混匀后,在570nm波短处测定OD值,合计抑制率,公式为抑制率=[(1-平均OD值试验组/平均OD值比力组)]×100%。

以阿霉素(DOX)作为阴性比力，化合物5～6对于3株肿瘤细胞(PC三、A54九、MCF7)的细胞毒性见图1。服从表明,化合物5对于肿瘤细胞愿望有清晰的抑制作用，而化合物6浸染较弱。

5品评辩说与论断

胡椒属为胡椒科中最大的属。国内外对于该属动物的化学成份以及药理浸染作了少许的钻研，发现其中含有生物碱、黄酮、木脂素、挥发油及脂肪酸类等多种成份。本钻研从荜茇根中别离判断了10个化合物，化合物3～四、7～10为初次从荜茇根中别离患上到，其中甾体类1个、糖苷类1个、有机酸类3个、生物碱类5个。近些年来钻研表明酰胺类生物碱是胡椒属动物的主要生物碱成份。本钻研发现胡椒碱为荜茇根中的主要成份，其化学结构为桂皮酰胺类。钻研证实此类化合物具备消炎止痛、抗惊厥、慌张、抗烦闷等浸染。经由抗肿瘤活性测试，表明荜茇酰胺有清晰的抗肿瘤活性，可抵偿荜茇根化学成份钻研的缺少，有利于将其开辟成抗癌的人造药物或者保健产物。

申明:本文所用图片、翰墨源头《中成药》2021年第1期，版权归原作者所有。如波及作品内容、版权等成果，请与本网分割

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