酶法测定林芝市售区别动物肌肉左旋肉碱含量（一）

以林芝市售别致黄牛、酶法羊、测定乌骨鸡、林芝白骨鸡、市售白条鸭以及鸽子为质料，区别对于其脊、动物胸、肌肉臀等部位肉中的左旋左旋肉碱含量妨碍测定、合成以及比照。肉碱接管酶技术测定法患上出左旋肉碱的含量浓度，并依据规范曲线方程合计出左旋肉碱含量。酶法经由对于黄牛、测定羊、林芝乌骨鸡、市售白骨鸡、区别白条鸭以及鸽子的脊、胸、臀等部位中左旋肉碱测定值的合成发现，黄牛各部位肉中左旋肉碱的含量均为最高：脊肉174.54mg/kg；臀肉173.56mg/kg；肩肉167.34mg/kg；胸肉174.241mg/kg，清晰高于羊、乌骨鸡、白骨鸡、白条鸡、鸽子中各部位肉左旋肉碱的含量（P<0.05）。其中，鸽子脊肉中左旋肉碱含量清晰高于胸肉、臀肉；羊胸肉左旋肉碱含量清晰高于脊肉、肩肉、臀肉；黄牛、白骨鸡、乌骨鸡的各部位肉间无清晰差距（P<0.05）。黄牛肉左旋肉碱含量清晰高于其余物种，对于立物种的脊肉以及胸肉的肉碱含量较高。

肉碱有3种光学异构体：左旋肉碱、右旋肉碱以及消旋体肉碱。右旋肉碱以及消旋体肉碱都是生物体中不存在的分解物资，惟独左旋肉碱在动物体内具备生物活性。左旋肉碱（L-carnitine亦称vitaminBT），化大名为L-β羟基-&ga妹妹a;-三甲胺丁酸，份子式为C7H15NO3，是一种匆匆使脂肪转化为能量的类氨基酸，也是一种相对于份子量较小的类卵白质份子，又称为肉毒碱，其主要源头是红肉。增长脂类代谢是其主要功能，它是调节线粒体内外酰基CoA/CoA（辅酶A）的比率，将长链脂酰基带入线粒体基质，同时将线粒体内产生的短链脂酰基输入。缺少左旋肉碱可能会泛起易操劳，肌肉有力，心慌等症状，严正者出今世谢凌乱，昏迷甚至诞生，这是因为干扰脂肪酸代谢而导致的能量分解缺少。肉碱在食物、营养、饲料以及医药等畛域运用宽泛，且运用远景较宽绰。肉碱当初仅有瑞士、日本、意大利等少数国家能斲丧，国内对于该产物钻研开辟相对于甚少。

动物肌肉具备肉质细嫩、口感润滑以及肉味香浓等特色，其脊肉、胸肉、臀肉、肩肉等机关中左旋肉碱活性成份含量较为充实，具备未必的钻研以及品评辩说价格。黄牛副产物的产量随着我国各大区域牛肉餐饮业的快捷发展而日益削减，而其作为人造左旋肉碱的紧张源头便引起越来越多的人关注。当初，国内外对于动物肌肉中左旋肉碱的提取主要接管超声波辅助高氯酸法，在此根基上接管酶法测定肌肉中左旋肉碱的含量可能较好防御右旋肉碱以及消旋体肉碱的产生，患上到纯人造的左旋肉碱废品钻研相对于比照周全。离子色谱法、功能液相色谱质谱联用法等是左旋肉碱的测定主要接管的方式，而酶法是近些年来发展起来较为坚贞的方式，运用酶法测定左旋肉碱的钻研还很少见报道。酶法中肉碱乙酰转移酶专一地浸染于左旋肉碱以及乙酰辅酶A之间的反映，进而天生乙酰肉碱以及游离的辅酶。

别致乌骨鸡、白骨鸡、白条鸭、鸽子、黄牛以及羊等动物身上的机关为质料，品评辩说了区别机关中左旋肉碱的含量。经由酶技术测定法患上到左旋肉碱的浓度，依据规范曲线回归方程合计左旋肉碱含量。为鸽子、乌骨鸡、白骨鸡、白条鸭、鸽子、黄牛以及羊的脊肉、胸肉、臀肉等中的左旋肉碱含量测定提供事实依据。酶法测定肌肉中左旋肉碱含量较快捷重大，所患上服从较精确灵便，更好地为实用运用动物肌肉充实的左旋肉碱资源以及鼎力开辟高附加值减肥食物提供一系列迷信指南。

1资料

1.1试验原资料

试验资料：黄牛肩肉、黄牛胸肉、黄牛臀肉、黄牛脊肉、羊肩肉、羊胸肉、羊臀肉、羊脊肉、乌骨鸡胸肉、乌骨鸡臀肉、乌骨鸡脊肉、白骨鸡胸肉、白骨鸡臀肉、白骨鸡脊肉、白条鸭胸肉、白条鸭臀肉、白条鸭脊肉、鸽子胸肉、鸽子臀肉、鸽子脊肉

资料源头：林芝农贸市场

1.2试验试剂

1.3仪器与配置装备部署

2方式

2.1试验妄想

将5，5'二硫代双-（2-硝基苯甲酸）以及游离的辅酶A反映产生黄色的物资，该物资色调的深浅与游离的辅酶A的含量成正比例关连。因为左旋肉碱以及游离的辅酶A是等摩尔反映关连，即可间接患上出试样中左旋肉碱的含量。简而言之，便是运用酶技术测定法丈量样品的吸光度值，再依据规范方程曲线合计出样品中碱含量。

2.2统计数据合成

每一次试验做3组平行试验，数据用SPSS18.0软件妨碍单因素方差合成，差距清晰者用Duncan’s妨碍多重比照。服从用“平均值±规范差”呈现，清晰水平配置为（P<0.05）。

2.3试验方式

2.3.1试验操作步骤

样品测定前解决：将别致乌骨鸡、白骨鸡、白条鸭、鸽子、黄牛以及羊的胸肉、脊肉、臀肉等部位肉剔除了脂肪、肌腱、筋等，经机关捣碎机捣碎后，分说称取2g样品置于A（脊肉）、B（胸肉）、C（臀肉）等离心管中，向每一支离心管中退出10mL3%体积分数的高氯酸（3mL100%的高氯酸加超纯水稀释，定容至100mL；挨次将离心管放在微型漩涡搅浑仪上匀浆5min；再将离心管放至装有过多水的烧杯内，把烧杯放入数控加热超声波洗涤机内超声波破壁解决10min；后将离心管放入0℃冰水搅浑物内30min，最后将解决液置于低速台式离神思解决10min留意配平），取上清液。加8mL3%高氯酸于积淀中，匀浆5min，超声波解决10min后，再离心10min，同样于0℃下静置30min，取上清液。并吞两次上清液，用NaOH（称取2gNaOH加超纯水消融，定容至100mL，浓度为0.5mol/L）调上清液pH至7.8。旋转蒸发器稀释上清液至1mL左右。用一次性针筒抽取上清液过0.45um孔径的滤膜，定容至5mL。

2.3.2规范曲线绘制及肌肉左旋肉碱提取患上率测定

向各小试管里分说退出0.4妹妹ol/LDTNB，取其中2mL，用另一容量瓶定容至50mL（避光保存）、1.33妹妹ol/LEDTANa2，以及pH为7.5的266.7妹妹ol/LTris-HCl缓冲液，定容至50mL，再移取180µL的搅浑溶液。左旋肉碱规范品配置装备部署成10mg/L，20mg/L，30mg/L，40mg/L，50mg/L，60mg/L，70mg/L，80mg/L区别浓度溶液，分说取60µL注入搅浑溶液，并稀释至2.5mL。再迅速退出5μL0.55妹妹ol/L肉碱乙酰转移酶溶液，于37℃情景反映16min后，置于96孔板中，于酶标仪内412nm处测定其左旋肉碱的吸光度。

左旋肉碱的提取患上率（mg/kg）=cv/100m

式中：C为依据规范曲线患上出提取液中左旋肉碱的品质浓度，mg/L；V为提取液定容后的体积，mL；m为牛肉的品质，g

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相干链接：左旋肉碱，右旋肉碱，氨基酸