三种监测地表水中粪大肠菌群规范方式的比照

多管发酵法、种监中粪照纸片法以及酶底物法是测地当初测定地表水中粪大肠菌群的罕用规范方式,经由三种方式对于粪大肠菌群规范物资以及实际地表水样妨碍合成检测,服从表明:多管发酵法、纸片法以及酶底物法用于粪大肠菌群的表水检测服从具备不同性;经由三种方式优弱点的比力,多管法老本低适用于老例检测,纸片法功能不便更适用于大批量快捷检测,酶底物法操作重大,不受园地限度可间接现场检测,更适用于应急现场监测。

前言

粪大肠菌群又称耐热大肠菌群，大肠的比是菌群在44.5℃能愿望并发酵乳酸产酸产气、需氧以及兼性厌氧的规范革兰氏阴性无芽孢杆菌。情景地表水中的种监中粪照粪大肠菌群主要来自粪便的传染，因此经由测定水中粪大肠菌群的测地含量，可间接患上出水体受粪便传染的表水状态，是大肠的比日后国内外情景监测部份主要监测名目之一，是菌群评估水体传染水以及善情景卫生的紧张指标，在《地表水情景品质（GB3838—2002）》中，规范规定Ⅰ、种监中粪照Ⅱ、测地Ⅲ、表水Ⅳ及Ⅴ类水粪大肠菌群的含量挨次≤200、200～2000、2000～10000、10000～20000及20000～40000个/L，我国地表水体粪大肠菌群含量宽泛较高，全副水域含量甚至超过Ⅴ类水质规范。

多管发酵法、纸片法以及酶底物法是当初国内测定地表水中粪大肠菌群罕用的规范方式。多管发酵法早在1985年就参加《生涯饮用水规范魔难方式（GB5750-85）》，并于2018年宣告勘误版，是粪大肠菌群测定的典型方式，它作为《水以及废水监测合成方式（第四版）》中的推荐方式，美国公共卫生协会（APHA）出书的《水以及废水规范魔难方式（20版）》中方式9221E也接管的是多管发酵法；纸片法在西方发达国家运用较少，主要在一些发展中国家运用，环保部在2015年宣告了纸片法的规范方式，它作为《水以及废水监测合成方式（第四版）》中的推荐方式（C类方式）；酶底物法是一种新型酶技术检测方式，已经在美、日、韩以及欧洲良多国家运用,2003年从美国引入我国，环保部在2018年宣告了酶底物法的规范方式。三种方式均是粪大肠菌群检测的规范方式，但在检出限、检测光阴以及操作历程等存在差距，本文参照环保行业规范，分说从粪大肠菌群规范物资以及实际地表水样妨碍检测合成以及比力钻研，并从监测光阴、老本、情景等总结出各方式的优弱点以及适用畛域，为广漠情景监测合成职员依据实际条件以及水样规范抉择最佳方式合成测试提供借鉴与参考。

1试验全副

1.1试剂以及资料

乳糖卵白胨作育基，EC肉汤作育基，粪大肠纸片I、II型，粪大肠菌群有证规范物资，DST(deflned)MMO-MUG酶底物试剂，无菌水，阴性菌株：大肠埃希氏菌ATCC25922，阴性菌株：产气肠杆菌ATCC13048。

1.2仪器以及配置装备部署

采样瓶，隔水式恒温作育箱：GNP-9160，恒温作育箱：HH.B11.420-135-Ⅱ，低压蒸汽灭菌器：YXQ-LS-100G，程控定量封口机：2009D,97孔定量盘，规范阴性比色盘，接种环，1mL移液管，试管：15妹妹×150妹妹。

1.3试验方式

多管发酵法HJ347.2—2018；纸片法HJ755—2015；酶底物法HJ1001—2018。

2试验服从与品评辩说

2.1空缺比力

空缺比力用无菌水做全挨次空缺测定。(1)多管发酵法：初发酵以及复发酵的管中均无色调变换，知足规范空缺要求；(2)纸片法：作育后的纸片上无任何微生物愿望，知足规范空缺要求；(3)酶底物法：作育后的97孔定量盘中无色调反映，知足H规范空缺要求。

2.2阴性及阴性比力

按多管发酵法、纸片法以及酶底物法三种方式试验要求妨碍作育，阴性菌株泛起阴性反映；阴性菌株泛起阴性反映。

2.3粪大肠菌群规范物资的服从（见表1)

由表1可知，三种方式对于粪大肠菌群规范物资的六次测试服从均在可负责畛域（83～312067MPN/L）内；从规范样品检测服从的相对于规范方始终看，多管发酵法为3.37%，纸片法为2.44%，酶底物法为1.87%，均知足各自对于应方式则范中相对于规范偏差的要求；从相对于误差来看，多管发酵法为3.72%，纸片法为2.6%，酶底物法为3.34%，均知足各自对于应方式则范中相对于误差的要求。

2.4实际地表水样服从（见表2)

18个区别情景地表水样同时用多管发酵法、纸片法以及酶底物法在相同条件下妨碍检测，为了使数据成正态扩散，先对于数据妨碍取对于数后妨碍统计学合成，运用SPSS两两妨碍双样本配对于t魔难。

由表2数据可能看出，关连系数r分说为0.98三、0.990、0.993，诠释三组数占无关性较好；各组的t值分说为0.05六、0.12四、0.247，均小于t0.05(17)=2.110，诠释三种方式对于同相同品的合乐成果无统计学意思上的清晰性差距，即多管法、纸片法以及酶底物法的试验服从具备不同性。

2.5三种方式的优弱点比力（见表3)

由表3可知，从试验操作来看，多管发酵法需要配置装备部署作育基并灭菌，妨碍复发酵，合成光阴是48h左右、监测光阴长、操作历程啰嗦且在灭菌情景下检测；纸片法以及酶底物法均可即将接种开始试验，较为啰嗦，酶底物法接种的使命量清晰比多管以及纸片法少良多，功能最高，纸片法比照多管法而言毋庸妨碍复发酵，功能比多管法高。从仪器配置装备部署来看，纸片法惟独要隔水作育箱，多管法以及酶底物法除了隔水作育箱外，均还需要一个配置装备部署。从经济成原来看，单个样品的老本多管发酵法最低，其次为纸片法，酶底物法老本最高。

3结语

经由多管发酵法、纸片法以及酶底物法对于规范样品以及实际地表水样的试验比力钻研可知，同相同品三种方式对于粪大肠菌群检测服从无统计学上清晰性差距，其服从具备不同性。它们作为环保规范方式，各有优弱点，可依据差此外条件以及要求抉择适量的方式。多管发酵法以及纸片快捷法曾经列为《国家地表水情景品质监测网监测使命作业教训书（试行）》的指定方式。

综上所述，多管发酵法运用最为宽泛，适用于水样稀释倍数未知的状态以及情景监测部份的老例检测；纸片法更适用于大批量样品的快捷检测；酶底物法虽老本高尚，但操作重大，对于检测情景不非凡要求，更适用于情景事件应急监测。

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