功能液相色谱法测定多类食物中胭脂虫红的含量(一）

胭脂虫红色素是液相胭脂近些年来逐步受到宽泛运用的人造色素，是色谱从寄生在仙人掌上的胭脂虫雌虫体内提掏出的一种人造蒽醌类色素，主要成份是法测胭脂红酸。20世纪90年月，定多的含我国初次从外洋引进胭脂虫，类食量并家养繁养乐成，物中2002年在云南省有妄想种植胭脂虫。虫红胭脂虫红因其晃动、液相胭脂牢靠等特色，色谱已经成为低劣的法测食用色素，它是定多的含一种美国食物以及药品监督打点局（FDA）应承既可用于食物，又可用于药品以及化装品的类食量人造色素。

国家规范GB2760-2014中对于胭脂虫红在区别种类食物中的物中运用限量妨碍了要求。外洋平凡接管美国化学品法典（FCC）的虫红规范法测定胭脂虫以及其相干产物中的胭脂虫红的含量，我国食物削减剂委员会则接管吸光度来呈现胭脂虫红的液相胭脂含量，可因此上两种方式不能运用于食物中胭脂虫红含量的测定。近些年来食物中胭脂虫红的相干检测方式的钻研不断泛起，如反相薄层色谱（TLC）/光密度扫描合成法、功能毛细管电泳法、液相色谱法以及超功能液相色谱—质谱联用法，可因此上钻研所波及的食物种类较少。本文针对于区别规范食物，包罗糕点、饼干、糖果、巧克力、熟肉废品等五种，钻研了胭脂虫红提取的前解决方式，建树了功能液相色谱法测定食物中的胭脂虫红的含量，可为日后食物中胭脂虫红的监督检测提供实用的参考方式。

一、试验全副

一、样品网络

网络了5种区别规范的样品，包装规格分为盒装、袋装及散装，分说为双莓味红丝绒蛋糕、香肠（原味）、棒棒糖、草莓味夹心饼干、巧克力豆。以上样品挨次编号为1～5#。

二、仪器与试剂

Agilenttechnologies1260型功能液相色谱仪（美国Agilent）；合终日平（德国Sartorius）；台式冷冻离神思3K15（德国SIGMA）；恒温水浴锅DKZ-2B（上海精宏）；漩涡混匀器根基型-MS3basic（德国IKA）；聚酰胺固相萃取小柱（60mg/3mL）。

胭脂红酸（CAS1260-17-9，纯度91.7%，德国Dr.EhrenstorferGmbH）；乙腈；0.01%、0.05%、0.1%甲酸水溶液；0.1%磷酸水溶液；2mol/L盐酸溶液；酸化甲醇（甲酸∶甲醇=1∶50；v∶v）；氨水甲醇（体积分数为5%的氨水∶甲醇=1∶1；v∶v）；超纯水。

三、试验条件

（1）规范溶液的配制

精确称取胭脂虫红酸规范品0.1090g（精确称量至0.0001g）于100mL容量瓶中，用超纯水消融、定容，配制成品质浓度为1000mg/L的蕴藏液（于4℃下保存，保存期3个月）。以胭脂红酸规范溶液为母液，以超纯水为稀释液配制成品质浓度分说为2.50、5.00、10.0、20.0、40.0、100mg/L系列规范溶液，现配现用。

（2）样品前解决

①样品的制备：将样品用破碎捣毁机短缺破碎捣毁，后装入清洁的可密封盛样容器中，密封并表明符号，于0℃～4℃冷藏保存。

②样品的提取与传染：称取破碎捣毁平均的样品2g置于50mL离心管中，退出2mol/L盐酸溶液10mL，旋紧盖子，置于80℃水浴中30min，掏出冷却，之后再退出甲醇15mL，振摇混匀，待传染。

（3）色谱条件

（a）色谱柱：Agilent5TC-C185μm×4.6妹妹×150妹妹；

（b）柱温：35℃；

（c）进样量：20μL；

（d）检测波长：276nm；

（e）流速：1.0mL/min；

（f）行动相：A：0.05%甲酸水溶液；B：乙腈；梯度洗脱挨次见表1。

二、服从与品评辩说

一、色谱条件的抉择

（1）检测波长的抉择经由二极管阵列检测器（DAD检测器）在190～600nm处妨碍扫描，服从见图1，发现胭脂红酸在紫外区最大罗致波长为276nm，在可见光区最大罗致波长为494nm。为对于两个波长的检测服从妨碍比照，本钻研检测波长同时抉择276nm以及494nm。如图2所示，胭脂红酸在276nm处罗致峰响应值最大，峰形较好。在494nm处峰形最佳，且杂质干扰较小，但响应值不如276nm。为了达到更低的检出限，削减定量误差，试验抉择检测波长为276nm。

（2）行动相的抉择

本试验选用TC-C18（4.6妹妹×150妹妹，5μm）柱，经由试验分说比照了区别规范、区别比例的行动相的别离成果。在思考色谱柱的耐酸功能根基上，试验分说用纯水、磷酸溶液、甲酸溶液作为水相，乙腈为有机相，共钻研了乙腈-纯水、乙腈-磷酸溶液、乙腈-甲酸溶液三种系统对于测定的影响。服从表明运用乙腈-纯水作为行动相时，残缺洗脱不出；运用乙腈-磷酸溶液作为行动相时，出峰光阴较慢，峰形泛起拖尾征兆；运用乙腈-甲酸溶液作为行动相时，别离成果好，峰形对于称。

试验发现，pH的着落有利于改善胭脂红酸的峰形。本试验比照了分说以0.01%甲酸溶液以及0.05%甲酸溶液作为行动相的别离成果，如图3。甲酸浓度为0.01%时，出峰光阴延后，响应值充实高，可是峰形泛起拖尾征兆，峰较宽且不同过错称；甲酸浓度为0.05%时，响应值充实高且峰造成果好。因此本试验抉择乙腈-0.05%甲酸溶液系统作为行动相，梯度挨次淋洗。

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