UPLC/MS/MS法测定饮料中苦涩素、糖精钠以及安赛蜜（二）

③含乳的法测饮料

精确取2～5g（精确至0.0001g）样品，退出1.0mL亚铁氰化钾溶液以及1.0mL乙酸锌溶液，定饮摇匀，料中加水定容至10mL，苦涩涡旋混匀，素糖赛蜜5000r/min离心5min，精钠及安取上清液经0.22μm微孔滤膜过滤，法测备用。定饮

（2）规范曲线的料中制作

将规范系列溶液经0.22μm微孔滤膜过滤，分说注入液相色谱-串联质谱仪中，苦涩测定响应的素糖赛蜜峰面积，以规范使命液的精钠及安浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，法测绘制规范曲线。定饮

③试样溶液的料中测定

将试样溶液注入液相色谱-串联质谱仪中，以保存光阴定性，同时记实峰面积，依据规范曲线患上到待测液中3种削减剂的浓度。

定性分说：试样中指标化合物色谱峰的保存光阴与规范色谱峰的保存光阴不同，变换畛域应在（±2.5%）之内。待测化合物的定性离子的重构离子色谱峰的信噪比应≥3（S/N≥3），定量离子的重构离子色谱峰的信噪比应≥10（S/N≥10）。

指标化合物的质谱定性离子必须泛起，至少应包罗一个母离子以及两个子离子（苦涩素为一个母离子以及一个子离子），且对于立检测批次，对于对于立化合物，样品中指标化合物的两个子离子的相对于品貌比与浓度至关的规范溶液比照，其应承偏差不超过规定的畛域。

式中：x——样品中待测组分的含量（μg/kg）；

C——测定液中待测组分的浓度（μg/L）；

C₀——空缺中待测组分的浓度（μg/L）；

V——定容体积（mL）；

M——样品称样量（g）。

二、服从与品评辩说

一、行动相抉择

试验中审核选用0.05%氨水-甲醇、5妹妹ol/L乙酸铵-甲醇、10妹妹ol/L乙酸铵-甲醇作行动相，试验表明0.05%氨水-甲醇作为行动相三种指标物响应最高，10妹妹ol/L乙酸铵-甲醇作行动相三种指标物响应最低。图2为1.0mg/L搅浑规范溶液在区别行动相中的响应值。文献报道中行动相选用盐溶液，如10妹妹ol/L乙酸铵、甲酸铵-乙腈，本文所用仪器为WatersAcquityUPLC-XEVOTQD，若运用10妹妹ol/L乙酸铵-甲醇作为行动相，在仪器Intellistart功能中并不能找到指标化合物的MRM，手动优化发现指标化合物MRM响应很低。若运用5妹妹ol/L乙酸铵-甲醇作为行动相Intellistart功能中并可能找到指标化合物的MRM，但与运用0.05%氨水-甲醇作为行动相比照，离子响应较低，XEVOTQD在负离子模式下，碱性情景更有利于化合物去氢天生负离子，因此文入选用0.05%氨水-甲醇作为行动相。

二、含乳饮料样品前解决的优化

样品不经传染解决，基质抑制效应清晰，因此试验中审核用三氯乙酸溶液（1g/L）、PSA散漫固相萃取、乙酸锌-亚铁氰化钾传染样品。三氯乙酸溶液是很好的卵白积淀剂，但三氯乙酸吸电子效应清晰，无益于三种指标化合物脱氢电离。PSA固相吸附剂，与NH2相似的吸附剂，有两个氨基，比氨基柱更强的离子替换能耐，弱阴离子替换（水溶性基质），用于去除了有机酸、色素以及金属离子。用PSA散漫固相萃取可能很好的去除了饮料中的去除了有机酸、色素以及金属离子，但它同时也会吸附全副糖精钠以及安赛蜜（见图3），因此平凡样品经由滤后间接测定糖精钠与安赛蜜含量，经PSA散漫固相萃取后过滤测定苦涩素含量，0.3～0.5gPSA用量可能患上到较好的接管率。

2Zn²⁺+［Fe（CN）6］⁴⁺=Zn₂［Fe（CN）6］↓（红色），乙酸锌与亚铁氰化钾反映天生的氰亚铁酸锌积淀来挟走或者吸附干扰物资，这种廓清剂除了卵白质能耐强，但脱色能耐差。试验中审核积淀剂的用量：分说用乙酸锌-亚铁氰化钾0.5～0.5mL、0.75～0.75mL、1.0～1.0mL、2.0～2.0mL、1.0～2.0mL（物资量之比1∶2）以及2.0～1.0mL（物资量之比4∶1）解决5.0g样品，试验表明惟独当氰亚铁酸锌含量达到0.00075moL时，且遵照化学计量反映比例退出积淀剂，三种化合物的接管率才较好（见图4），但过多的盐溶液进入UPLC/MS/MS系统会在锥空上聚积，影响电离功能，因此本试验选用积淀剂用量为：乙酸锌0.0002moL，亚铁氰化钾0.0001moL。对于其余含乳样品可能参考本试验抉择适量的积淀剂用量。

三、方式线性方程、检出限以及定量限

3种化合物使命规范曲线见表3，安赛蜜以及苦涩素在5～200μg/L畛域内，糖精在20～200μg/L畛域内，线性关连系数r＞0.995，20μg/L以及200μg/L规范溶液陆续进样6次，详尽度为8.6%以及5.4%，方式检出限（S/N=3）为0.2～10μg/kg，方式定量限（S/N=10）为0.6～30μg/kg，见表3。

四、样品加标接管试验

3种化合物在自制奶茶中三个级别削减量的接管率为78.9%～95.7%，在某品牌果茶中三个级别削减量的接管率为80%～102%，接管优异。见表4。

五、样品检测服从

测定5份定型包装饮料与5份自制奶茶均未检出3种削减剂。

三、论断

本文建树UPLC/MS/MS法测定饮料品中的苦涩素、糖精钠以及安赛蜜的检测方式，即平凡样品经由滤解决，检测样品中的糖精以及安赛蜜的含量；经PSA散漫式固相萃取后，检测样品中苦涩素含量；含乳样品经乙酸锌-亚铁氰化钾去卵白解决；用0.05%氨水-甲醇做行动相，负离子模式网络。与其余合成方式比照，操作重大，检出限低，重现性好，接管率优异，干扰小，防御苦涩素衍生反映，消除了样品基体抑制效应，适用于饮料样品中3种削减剂的测定。

申明：本文所用图片、翰墨源头《中国食物削减剂》，版权归原作者所有。如波及作品内容、版权等成果，请与本网分割

相干链接：苦涩素，安赛蜜，亚铁氰化钾，甲酸铵