变波长功能液相色谱法同时测定酱腌菜中的安赛蜜以及脱氢乙酸（一）

酱腌菜，变波在GB2760-2014中的长功测定菜中分类为腌渍的蔬菜，是相色我国传统的斲丧食物，也是谱法广漠斲丧者比照兴致的食物之一。食物削减剂在酱腌菜的酱腌及脱加工历程中曾经宽泛运用，最罕用的赛蜜酸削减剂为防腐剂（苯甲酸、山梨酸以及脱氢乙酸）以及甜味剂（糖精钠、氢乙安赛蜜）。变波削减防腐剂可能抑制产物中糜烂微生物的长功测定菜中愿望，缩短酱腌菜产物的相色保质期；削减甜味剂则是为了削减产物的风韵口感。过多的谱法食物削减剂会对于人体瘦弱造成危害，尽管GB2760-2014曾经规定了酱腌菜中这些削减剂的酱腌及脱运用限量，但不翦灭同样平凡斲丧企业为了缩短产物保质期等指标而超量运用食物削减剂，赛蜜酸因此有须要对于酱腌菜中的氢乙削减剂含量妨碍检测。国标方式GB5009.28-2016可能同时检测食物中苯甲酸、变波山梨酸以及糖精钠含量，而且方式比照重大，适用于酱腌菜产物。

检测脱氢乙酸的国标方式有GB5009.121-201六、GB/T23377-2009，而检测安赛蜜的国标方式GB/T5009.140-2003仅适用于饮料产物的检测，并不适用于酱腌菜产物。当初报道的安赛蜜检测方式有离子色谱法、液质联用法、超功能液相色谱法以及液相色谱法。离子色谱法的前解决比照啰嗦、液质联用法仪器比照高尚、超功能液相法对于色谱柱要求较高，而功能液相色谱仪为检测机构的根基配置装备部署，又能知足安赛蜜的检测。因此拟接管功能液相色谱法测定酱腌菜中的安赛蜜，而脱氢乙酸也可能勤勉用液相色谱法测定，本钻研建树了一种变波长功能液相色谱法同时测定酱腌菜中安赛蜜以及脱氢乙酸的方式。该方式前解决重大、接管率高、详尽度高，可用于酱腌菜中甜味剂安赛蜜以及防腐剂脱氢乙酸的检测。

一、资料与方式

一、资料与试剂

酱腌菜样品（榨菜、雪菜、萝卜干、乳黄瓜等）购于无锡市各超市；安赛蜜、脱氢乙酸规范品购于德国Dr.Ehrenstorfer公司，纯度大于99.5%；
甲醇（色谱纯，迪马科技）；氢氧化钠、硫酸锌、乙酸铵（合成纯，国药总体）；微孔滤膜（0.45µm，上海安谱）；试验用超纯水为试验室Mili-Q超纯水机制备。

二、仪器与配置装备部署

1260型功能液相色谱仪：配有二极管阵列检测器（DAD）（美国安捷伦公司）；IKA漩涡混匀器（广州艾卡）；超声波洗涤机（无锡思耐德）；CT14D离神思（南京瑞兰达）；ME204E合终日平、pH计（瑞士梅特勒公司）。

三、试验方式

（1）溶液配制

氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠，加水消融并定容至1000mL；硫酸锌溶液：称取120g硫酸锌，加水消融并定容至1000mL；乙酸铵溶液（0.02mol/L）：称取1.54g乙酸铵，加水消融并定容至1000mL；安赛蜜规范溶液配制：称取安赛蜜规范品0.10g（精确至0.0001g），用水消融并定容至100mL，规范蕴藏液的浓度为1000mg/L，贮存于4℃冰箱中。运历时依据需要用水稀释成适量浓度的规范运用液，现配现用。脱氢乙酸规范溶液配制：称取脱氢乙酸规范品0.10g（精确至0.0001g），用10mL氢氧化钠溶液消融并用水定容至100mL，规范蕴藏液的浓度为1000mg/L，贮存于4℃冰箱中。运历时依据需要用水稀释成适量浓度的规范运用液，现配现用。

（2）样品前解决

称取2.50g经破碎捣毁、混匀的样品至25mL比色管中，退出10mL水、5mL硫酸锌溶液，涡旋混匀，用氢氧化钠溶液调pH至7.5，用水定容至25mL，超声提取10min，转移至50mL离心管内，5000r/min离心10min，上清液经0.45μm滤膜过滤作为测定液，勤勉用液相色谱仪测定。

（3）功能液相色谱条件

色谱柱：AgilentZORBAXXDB-C18（250×4.6妹妹，5μm，美国安捷伦公司）；行动相：90%0.02mol/L乙酸铵溶液+10%甲醇；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；进样量：10μL；检测波长挨次：0～8min，226nm；8～12min，293nm。

二、服从与合成

一、样品前解决条件的优化

GB5009.121-2016样品中脱氢乙酸因此水来提取的，思考到安赛蜜（乙酰磺胺酸钾）易溶于水，以因此水来提取酱腌菜中的安赛蜜以及脱氢乙酸。酱腌菜中含有大批的卵白质等成份，假如不去除了将这些成份将会干扰测定。本试验接管加标接管试验比照了两类积淀剂（亚铁氰化钾以及乙酸锌、氢氧化钠以及硫酸锌）的积淀别离成果。经氢氧化钠与硫酸锌积淀后，对于样品中的安赛蜜以及脱氢乙酸的测定均无影响，加标接管率挨近100%；而经亚铁氰化钾以及乙酸锌积淀后，对于样品中安赛蜜的测定无影响，但对于脱氢乙酸的测定有影响，加标接管率仅为80%左右，可能是因为脱氢乙酸在水中的消融度较低，随着卵白质等杂质一起积淀下来。因此，试验接管氢氧化钠与硫酸锌作为积淀剂。

二、变波长检测条件确凿定

将适量浓度的安赛蜜规范溶液、脱氢乙酸规范溶液分说接管DAD妨碍光谱扫描，以判断其最佳罗致波长。由图1可知，安赛蜜的最佳罗致波长为226nm。由图2可知，脱氢乙酸的最佳罗致波长有两个，分说为230nm以及293nm。思考到对于羟基苯甲酸酯类、苯甲酸、山梨酸等防腐剂在230nm处也有较大罗致，抉择293nm作为脱氢乙酸的特异检测波长。

在选定的色谱条件下，安赛蜜的出峰光阴在6min左右，脱氢乙酸的出峰光阴为10min左右，以是选定变波长检测挨次为：0～8min，226nm；8～12min，293nm。

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