响应面法优化牛舌草多糖提取工艺及其对于DNA氧化伤害的呵护浸染（二）

（12）牛舌草多糖对于DNA氧化伤害的面法呵护浸染

参考文献中的方式，取0.4mLl妹妹ol/L的优化艺及于D氧化EDTANa溶液、0.4mL5mg/mL的牛舌DNA溶液、0.35mL5妹妹ol/L的草多H₂O₂溶液、0.2mL3.2妹妹ol/L的糖提FeCl₃溶液以及1mL区别品质浓度的精制多糖一磷酸缓冲溶液(浓度为0.2mol/L，pH=7.4)，取工其对退出0.35mL1.2妹妹ol/L的伤害VC溶液，在55℃水浴中反映，护浸光阴为20min，面法随后向试管中快捷退出0.35mL0.3mol/L硫代巴比妥酸(TBA)溶液以及0.75mL0.6mol/L三氯乙酸溶液，优化艺及于D氧化在105℃烘箱中显色15min，牛舌放冷后离心，草多取上清液测定532nm处吸光度，糖提以磷酸缓冲溶液作为空缺比力，取工其对依据下面的伤害公式合计多糖对于-OH诱导的DNA氧化伤害的呵护浸染：

其中：A₀为氧化伤害组(磷酸缓冲溶液+反映系统)吸光度；A₁为多糖呵护组(多糖溶液+反映系)吸光度。

二、服从与合成

一、单因素试验服从与合成

（1）料液比对于牛舌草多糖提取率的影响

详尽称取5份牛舌草粉末各0.5g，置50mL具塞锥形瓶中，分说退出5mL、10mL、15mL、20mL、25mL蒸馏水，超声30min(室温，功率200W)，离心，患上样品提取液，详尽排汇牛舌草提取液0.5mL测定多糖含量，服从见图1，从试验服从可能看出20mL溶剂的多糖含量最高，故抉择0.5g药材加20mL蒸馏水(料液比为1∶40)作为提取溶剂的量。

（2）提取光阴对于牛舌草多糖提取率的影响

详尽称取5份牛舌草粉末各0.5g，置50mL具塞锥形瓶中，加20mL蒸馏水超声提取10min、20min、30min、40min、50min(室温，功率200W)，离心，患上样品提取液，详尽排汇牛舌草提取液0.5mL测定多糖含量，服从见图2，从试验服从可能看出，超声30min以及40min时多糖提取功能较高，但思考到光阴老本，因此选用超声30min作为提取光阴。

(3)超声功率对于牛舌草多糖提取率的影响

详尽称取5份牛舌草粉末各0.5g，置50mL具塞锥形瓶中，加20mL蒸馏水份辩在50W、100W、150W、200W以及250W超声提取30min，测定多糖含量，服从见图3，从试验服从可能看出，超声功率为200W时的多糖含量最高，因此选用200W作为超声提取功率。

（4）提取次数对于牛舌草多糖提取率的影响

详尽称取5份牛舌草粉末各0.5g，置50mL具塞锥形瓶中，加20mL蒸馏在200W分说超声提取1次、2次、3次、4次以及5次，每一次30min，测定多糖含量，服从见图4，从试验服从可能看出，随着提取次数削减，多糖含量也着落，但提取3次后多糖含量着落不清晰，因此选用超声3次作为提取次数。

二、响应面试验服从

（1）模子的建树以及数据合成

依据单因素试验服从，以料液比(A)、提取光阴(B)、超声功率(C)、提取次数(D)为试验因素，运用Design-Expert8.0.6软件妄想四因素三水平试验合成，共计29个试验，响应面试验妄想以及服从见表3。

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