响应面法优化绿豆抗氧化肽的制备工艺（二）

（2）绿豆多肽抗氧化性与酶浓度的面法关连

参照于慧等人的方式妨碍DPPH从容基翦灭率的测定。将2mL未必浓度的优化艺绿豆多肽溶液以及2mL的0.12妹妹01·L^-1DPPH溶液妨碍搅浑，避光于25℃条件下反映30min，绿豆掏出后于517nm波长下妨碍吸光值的抗氧测定，此时吸光度值记实为A_i；将上述历程中的化肽2mLDPPH溶液用无水乙醇取代，而后与2mL绿豆多肽溶液妨碍反映，备工此条件下测定吸光值记实为A_j，面法将2mL无水乙醇与2mLDPPH溶液反映的优化艺条件作为空缺组，此时记实吸光值为Ao。绿豆服从如图2所示。抗氧

由图2可知，化肽当酶浓度低于6％时，备工DPPH翦灭率随着酶浓度的面法削减而增大，当酶浓度超过6％时，优化艺DPPH翦灭率随着酶浓度的绿豆着落而着落。部份泛起初回升后着落的原因在于随着酶浓度的着落，实用酶浓度逐步加大。当底物的浓度连结巩固，实用酶浓度逐步削减，从而起到抑制作用，使酶水解的不残缺，故水解患上到的抗氧化肽削减，进而导致DPPH翦灭率着落。

（3）绿豆多肽抗氧化性与pH的关连

本试验在于钻研酶法对于绿豆卵白水解的抗氧化肽的工艺优化，故以DPPH为指标，抉择酶解光阴、酶解温度、酶削减量以及pH为因素妨碍单因素试验。改动反映pH，服从见3所示。
 

由上图可知，当pH在7.0～9.0时，DPPH的翦灭率随着pH的增大逐步增大，当pH为9.00时，DPPH翦灭率达到最大值，为43.89％。当pH超过9.0时，DPPH翦灭率逐步减小。这是因为卵白酶惟独在未必的pH区间内具备较高的活性，当卵白酶处于过酸或者过碱的条件下时卵白酶的结构会被破损，导致全副卵白无奈残缺水解，疏水基团未残缺披露，使患上天生肽的抗氧化涪陛着落。

（4）绿豆多肽抗氧化性与酶解光阴的关连

经由单因素试验的服从，可能筛选出各因素的三个水平。以是在此根基之上，运用统计合成软件建树4因素3水平的Box—Behnken模子，妨碍回应面优化妄想。改动酶解光阴服从见4所示。

二、服从与品评辩说

一、单因素试验服从

（1）绿豆多肽抗氧化性与酶解温度的关连

将绿豆卵白配置装备部署成未必浓度的溶液，水浴加热至100℃妨碍15min均质解决。待溶液冷却至酶解最适温度，水浴保温，向溶液中退出0.5mol／L的NaOH调节其pH，酶解一段光阴后100℃水浴灭活10min，室温下离心(4000r／min，20min)，将上清液冻干后保存。服从如图l所示。

由图1可知，当酶解温度低于50℃，DPPH翦灭率与温度成正比，当温度超过50℃时，DPPH翦灭率开始着落。这是因为卵白酶对于晃动的要求较高，温度过低会影响酶解的反映速率，使酶解反映不残缺，从而影响抗氧化肽的抗氧化成果。而温度过高则会影响卵白酶的活性，使卵白酶的活性着落，无奈使卵白水解成具备抗氧化性的小份子肽段，从而使DPPH翦灭率着落。

（2）绿豆多肽抗氧化性与酶浓度的关连

将2mL未必浓度的绿豆多肽溶液以及2mL的0.12妹妹01·L^-1DPPH溶液妨碍搅浑，避光于25℃条件下反映30min，掏出后于517nm波长下妨碍吸光值的测定，此时吸光度值记实为A_i；将上述历程中的2mLDPPH溶液用无水乙醇取代，而后与2mL绿豆多肽溶液妨碍反映，此条件下测定吸光值记实为A_j，将2mL无水乙醇与2mLDPPH溶液反映的条件作为空缺组，此时记实吸光值为Ao。服从如图2所示。

由图2可知，当酶浓度低于6％时，DPPH翦灭率随着酶浓度的削减而增大，当酶浓度超过6％时，DPPH翦灭率随着酶浓度的着落而着落。部份泛起初回升后着落的原因在于随着酶浓度的着落，实用酶浓度逐步加大。当底物的浓度连结巩固，实用酶浓度逐步削减，从而起到抑制作用，使酶水解的不残缺，故水解患上到的抗氧化肽削减，进而导致DPPH翦灭率着落。

（3）绿豆多肽抗氧化性与pH的关连

本试验在于钻研酶法对于绿豆卵白水解的抗氧化肽的工艺优化，故以DPPH为指标，抉择酶解光阴、酶解温度、酶削减量以及pH为因素妨碍单因素试验。

试验条件妨碍试验，改动反映pH，服从见3所示。

由上图可知，当pH在7.0～9.0时，DPPH的翦灭率随着pH的增大逐步增大，当pH为9.00时，DPPH翦灭率达到最大值，为43.89％。当pH超过9.0时，DPPH翦灭率逐步减小。这是因为卵白酶惟独在未必的pH区间内具备较高的活性，当卵白酶处于过酸或者过碱的条件下时卵白酶的结构会被破损，导致全副卵白无奈残缺水解，疏水基团未残缺披露，使患上天生肽的抗氧化涪陛着落。

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