细胞水平染料木素协同维生素D3的抗骨质涣散浸染（二）

2 服从与合成

2.1 维生素D₃散漫染料木素对于MG-63细胞增殖以及分解的细胞协同影响

接管MTT法测定药物浸染细胞24h后MG-63的细胞存活率。如图1a所示，水平素维生素D₃在1.56～100.00μmol/L浓度对于MG-63细胞无毒性，染料在6.25，木素12.50，维生25.00，骨质50.00，涣散100.00μmol/L浓度可清晰增长MG-63细胞的浸染增殖（P＜0.05）。如图1b所示，细胞协同染料木素在1.56～50.00μmol/L浓度对于MG-63细胞无毒性。水平素染料木素浓度在3.12，染料6.25以及12.50μmol/L可清晰增长MG-63细胞的木素增殖（P＜0.05）。故抉择1.56，维生3.12，骨质6.25，涣散12.50，25.00，50.00μmol/L浓度妨碍组合。如图1c所示，低浓度的维生素D₃以及染料木素散漫用药对于MG-63细胞的增殖具备协同浸染，且浓度在6.25μmol/L时加倍清晰。

ALP作为成骨细胞分解的前期符号之一，可随着成骨细胞的愿望而表白削减，可能代表骨组成的状态。药物浸染48h后测MG-63细胞的ALP活性。如图2a以及2b所示，药物浓度在3.12～50.00μmol/L时，与染料木素以及维生素D₃单药组比照，散漫组可清晰增强MG-63细胞中ALP活性。维生素D₃在浓度为3.12μmol/L以及6.25μmol/L时抑制了ALP活性，而散漫染料木素可能使维生素D₃对于ALP活性的抑制作用逆转。染料木素浓度在3.12，6.25，12.50μmol/L时可清晰增强ALP活性。

交联的卵白质以及胶原卵白随着成骨细胞愿望增殖，可产生羟基磷灰石并聚积在基质中矿化，茜素红可散漫组成的钙结节发生色调变换，产生深红色的化合物。抉择浓度为6.25μmol/L的维生素D₃，染料木素及其两者散漫用药组妨碍钙结节的检测。矿化作育21d后，可在颠倒显微镜下审核到MG-63细胞中的钙结节，矿化组以及试验组组成为了更多的不透明结节。如图2c所示，积攒的钙结节被茜素红染成深红色化合物，形态不法则，表明有成骨活性。退出10％的西吡氯铵（CPC）消融散漫钙结节的茜素红以定量钙聚积状态，在550nm下丈量吸光度值，如图2d所示，表明维生素D₃散漫染料木素可组成更多茜素红以及钙产生的深红色化合物增长矿化基质的组成。

2.2 染料木素以及维生素D₃对于MG-63细胞OPG、RANKL表白的影响

药物浸染24h后，接管PT-PCR方式经由比照Ct法测定OPG以及RANKL在成骨细胞的相对于表白量。如图3a以及3b所示，与比力组比照，单药染料木素组以及维生素D₃组的OPGmRNA表白量均削减；而且与单药组比照，染料木素散漫维生素D₃组OPGmRNA表白量清晰削减，但削减的浸染不是呈剂量依附性的。如图3c以及3d所示，与比力组比照，染料木素以及维生素D₃组的MG-63细胞中RANKLmRNA表白均着落。在浓度为6.25～50.00μmol/L畛域内，散漫组的RANKLmRNA表白比维生素D₃组清晰着落，而与染料木素组比力无差距。OPG与RANKL的相对于比例破损可能导致骨罗致削减，微结构改动以及骨折危害，在破骨细胞生物学以及骨罗致调节中起到紧张决定因素以及最终步骤的浸染，如图3e以及3f所示，散漫组中OPG/RANKL的比值清晰大于维生素D₃以及染料木素组，且染料木素、维生素D₃以及维生素D₃与染料木素散漫组对于OPG/RANKL的比值均随着药物浓度的增大而减小。表明维生素D₃与染料木素散漫可能经由OPG/RANKL蹊径对于成骨细胞增殖分解产生协同浸染。此外，染料木素对于MG-63细胞的增殖以及分解浸染较维生素D₃清晰。

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