单枞茶酒的抗氧化活性评估（二）

①测定DPPH·翦灭能耐

参考Kumaran等及Floegel等的单枞的抗方式并作改善。将单枞茶酒样品作一系列浓度地稀释，茶酒将每一稀释度样品溶液加到2支5mL试管中，氧化每一支试管加0.2mL样品液；而后在一支试管中退出1×10^-4mol/L的活性DPPH乙醇溶液3.8mL，在另一支试管中退出3.8mL乙醇，评估两支试管短缺摇匀后于室温下置于黝黑处孵育30min，单枞的抗而后于波长517nm处测定吸光度。茶酒用乙醇作空缺。氧化按下式合计DPPH·翦灭率(I_D)：

I_D(％)=[1～(A₁—A₂)／Ao]×100

式中，活性A₁：0.2mL茶酒样液+3.8mLDPPH乙醇溶液的评估吸光度；

A₂：0.2mL茶酒样液+3.8mL乙醇的吸光度；

Ao：0.2mL乙醇+3.8mLDPPH乙醇溶液吸光度。

②测定ABTS·翦灭能耐

参照Dudonne等的单枞的抗方式并作改善。取7妹妹ol／L的茶酒ABTS溶液5mL，退出到88μL0.14mol／LK₂S₂O₈溶液中，氧化混匀，活性室温下避光静置12h，评估即患上ABTS·蕴藏液。试验前用10妹妹o/LpH7.4的磷酸缓冲液稀释成使命液，使其在波长734nm下吸光度为0.70±0.02。将单枞茶酒作一系列浓度地稀释，取10μL样品液加到200μLABTS使命液中，混匀并静置6min后测定波长405nm下的吸光度。以纯溶剂作空缺。按下式合计ABTS·翦灭率(I_A)：

I_A(％)=(1-A₁／Ao)×100

式中，A₁：茶酒样液的吸光度；

Ao：空缺的吸光度。

③测定·OH翦灭能耐

参考候学敏等的方式并稍作改善。将单枞茶酒样品液用dd水作一系列浓度地稀释。取10mL小试管多少多，分说挨次退出8妹妹ol／。FeS0₄溶液2mL、8妹妹ol／L水杨酸-乙醇溶液2mL以及区别浓度的单枞茶酒样品液2mL，以dd水作空缺，最后退出8.5mol／LH₂0₂溶液2mL，摇匀后于40℃水浴中静置20min，而后4000r/min离心5min，取上清液于波长510nm处测定吸光度，参比溶液以dd水替换H₂O₂溶液。按下式合计·0H翦灭率(I_H)：

I_H(％)=[1-(A_n-A_d)／A_o]×100

式中，A_o：空缺吸光度；

A_n：退出茶酒样液后吸光度；

A_d：参比溶液吸光度。

④测定0₂^-·翦灭能耐

参考PaVithm等及候学敏等的方式并作改善。取10mL小试管多少多，分说退出4.5mLpH8.O的Tris-盐酸缓冲液，于30℃水浴中静置15min，在各试管中分说退出0.2mL区别浓度的单枞茶酒样品液以及30℃预热过的3妹妹ol／L的邻苯三酚溶液0.3mL(用10妹妹o/L盐酸配制)，摇匀后于30℃水浴中静置5min，而后迅速退出5滴8mol/L盐酸妨碍反映。用dd水作空缺比力，在波长325nm处测定吸光度。按下式合计O₂^-·翦灭率(Is)：

I_s(％)=(A_o-A_n)／A_o×100

式中，A_o：空缺的吸光度；

A_n：退出茶酒样液后的吸光度。

（4）抗氧化能耐指数(ORAC)的测定

ORAC法是抗氧化钻研畛域关注较多的一种抗氧化活性评估方式，当初已经乐成运用于生物废品、食物、化学品及人造动物提取物等多种样品的抗氧化能耐合成。详尽测定步骤如下：

①精确称取AAPH0.414g，用75妹妹ol／LpH7.4的磷酸缓冲液消融并定容至10mL，即患上153妹妹ol／L的AAPH溶液。

②精确称取FL0.04g，用75妹妹ol／LpH7.4的磷酸缓冲液消融并定容至25mL，即患上4.25妹妹ol/L的FL贮液甲；排汇FL贮液甲0.05mL并以磷酸缓冲液定容至50mL，即患上4.25×10-3妹妹ol／L的FL贮液乙；而后将FL贮液甲以及FL贮液乙置于4℃备用。试验时排汇FL贮液乙0.5mL并以磷酸缓冲液定容至25mL，可患上8×10-3妹妹o儿的稀释液。

③精确称取2.5mgTrolox，用甲醇消融并定容至10mL，即患上1妹妹ol／L的Trolox溶液。试验时候说排汇Trolox溶液l、0.八、0.六、0.四、0.二、0.1mL于10mL容量瓶，用75妹妹ol/LpH7.4磷酸缓冲液定容，即患上区别浓度Trolox溶液。

④量取单枞茶酒10mL置于lL容量瓶中，用75妹妹ol/LpH7.4磷酸缓冲液定容，即患上10mL/L的样品液。

⑤量取100μLFL稀释液置于96孔荧光板中，用酶标仪在激发波长490nm、发射波长514nm下测定荧光值(记作‰)。而后，退出区别浓度的TroloX溶液50μL并振摇2min，37℃下孵育8min后赶快退出50μLAAPH溶液启动反映。反映时期，每一隔2min便测一次荧光值(记作A_n)，直至荧光值衰减成直线。由下式合计荧光消退曲线下的面积(AUC)，合计呵护面积(NetAUC)，而后以NetAUC值为纵坐标，以TroloX溶液浓度为横坐标，建树标曲。

AUC=0.5×[2×(Ao+A₁+…+A_n+1+A_n)-A_o-A₁]×△t

NetAUC=AUC_sample-AUC_blank

⑥排汇样品液，按上述方式测定以及合计单枞茶酒ORAC值。

二、服从与合成

一、单枞茶酒中儿茶素以及GA测定服从

表2为儿茶素以及GA标品的标曲方程。由决定系数R²可知方程均拟合优异。

图1为单枞茶酒中儿茶素以及GA的HPLC合成图谱，表3为合计出的单枞茶酒中的儿茶素以及GA含量。
 

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