基于血清药归天学与网络药理学探究麝香通心滴丸治疗冠心病的机制（一）

指标基于血清药归天学与网络药理学探究麝香通心滴丸治疗冠心病的基于究麝机制。方式接管HPLC-Q-TOF/MS联用技偶合成麝香通心滴丸的血清学探香通心滴心病入血成份。条件为Hydro-ＲP C18色谱柱(250 妹妹×4.6 妹妹，药归药理4μm);行动相0.4%甲酸乙腈-0.2%甲酸，天学梯度洗脱;体积流量1.3 mL/min;进样量10μL。网络丸治运用PharmMapper服务器、疗冠GeneCards数据库预料以及筛选麝香通心滴丸入血成份治疗冠心病的基于究麝浸染靶点，String数据库绘制卵白相互浸染网络，血清学探香通心滴心病Cytoscape软件构建成份-疾病-靶点网络图，药归药理借助David数据库对于靶点妨碍GO合成以及KEGG通路合成，天学运用Autodock Vina软件对于入血成份以及中间靶点妨碍份子对于接。网络丸治服从共患上到8种入血成份，疗冠波及134个交加靶点，基于究麝可能经由ErbB signaling pathway、血清学探香通心滴心病VEGF signaling pathway、药归药理PPAＲsignaling pathway等信号通路治疗冠心病，且份子对于接呈现入血成份与中间靶点散漫性较好。论断麝香通心滴丸8种入血成份可能是其治疗冠心病的物资根基，可为深入诠释该制剂浸染机制提供未必的依据。

“血清药归天学”这一事实开始由德国迷信家格哈德·多马克所提出，其后我国迷信家王喜军传授提出适宜中医药事实的中药血清药归天学。中药成份较为重大，经口服给药后，宽泛觉患上发挥药效的活性成份应该是被吸支出血的成份。经由火析口服给药后血中成份，可判断中药在体内间接起浸染药效成份。网络药理学经由生物学网络中节点的衔接以及关连来合成药物对于疾病网络的干预，从部份效应角度预料药物靶点，是诠释中药复方浸染机制的紧张伎俩之一。近些年来文献报道的网络药理学钻研大少数因此各数据库中成份的口服生物运用度为筛选指标。可是多味中药在组成复方后，其原有的一些成份在此外成份的协同浸染下，会使其原本较低的生物运用度患上到改善，而且变换响应的药物剂型也会普及其生物运用度。因此对于多成份的中药复方制剂，仅靠数据库中的口服生物运用度为筛选指标，会导致靶点预料不够精确。麝香通心滴丸为内蒙古康恩贝药业有限公司圣龙分公司已经上市产物，收载于2015年版《中国药典》一部，于2017年1月13日被参加国家中药呵护种类，全方包罗麝香、蟾酥、人参茎叶总皂苷、丹参、家养牛黄、熊胆粉、龙脑，该种类属于心脑血管畛域用药。尽管临床上治疗冠心病疗效清晰，但其药效物资根基并不清晰。本文经由HPLC-Q-TOF/MS对于麝香通心滴丸妨碍血清药归天学钻研，并基于网络药理学对于入血成份治疗冠心病的浸染机制妨碍钻研，为深入诠释麝香通心滴丸浸染机制提供未必的依据。

1资料

1.1仪器

1260功能液相色谱仪、6530 Q-TOF/MS四极杆飞翔光阴质谱仪(美国安捷伦公司);高速冷冻离神思、涡旋振荡器(美国赛默飞世尔科技公司);Sartorius BS210S十万分之一电子天平(德国赛多利斯公司)。

1.2试剂与药物

麝香通心滴丸(内蒙古康恩贝有限公司圣龙分公司，批号180607)。蟾毒灵(批号111981-201501，纯度99.2%)、熊去氧胆酸(批号110755-201704，纯度99.4%)、脂蟾毒配基(批号110718-201809，纯度98%)购自中国食物药品检定钻研院;远华蟾毒精(批号PS010798，纯度98%)、去乙酰华蟾毒精(批号PS010804，纯度98%)购自成都普思生物科技股份有限公司;沙蟾毒精(批号5283，纯度98%)、甘氨胆酸(批号6723，纯度98%)购自上海诗丹德规范技术服务有限公司;牛磺胆酸(批号PST190801-061，纯度98%)购自成都乐美天医药科技有限公司。乙腈(批号SHBK3440，色谱纯)、甲醇(批号10958407824，色谱纯)购自默克化工技术(上海)有限公司。

1.3动物

5只SPF级瘦弱雄性SD大鼠，购自上海西普尔必凯试验动物有限公司，斲丧答应证号SCXK(沪)2013-0016，由浙江中医药大学动物试验中间代为饲养，使答应证号SYXK(浙)2013-0184，条件为温度(22±1)℃，相对于湿度50%～60%，12 h光照，透风频率15～20次/h。大鼠以规范饲料喂养，饮水从容，伦理魔难决定编号ZSLL-2017-054。

2方式

2.1麝香通心滴丸入血成份合成

2.1.1麝香通心滴丸混悬液制备

取过多麝香通心滴丸粉研磨成粉末，退出过多0.5%羧甲基纤维素钠溶液，调整品质浓度为0.4 g/mL，即患上，摇匀备用。

2.1.2动物给药与血清样品网络

SD大鼠给药前禁食12 h，从容饮水，以6.4 g/kg剂量给药。给药前网络空缺血样，在给药1五、30、4五、60 min后眼眶取血各约0.5 mL，收集至EP管中静置30 min，室温下以3 000 r/min离心10 min，取下层血清，备用。

2.1.3血清样本解决

分说详尽排汇200μL空缺血清以及含药血清(将“2.1.2”项下4个光阴点含药血清各排汇50μL混匀)于1.5 mL EP管内，退出5倍量甲醇涡旋5 min，离心(4℃、10 000 r/min)10 min，上清液于常温下氮气吹干，100μL甲醇复溶，涡旋5 min，离心(4℃、10 000 r/min)5 min，取上清液供MS合成。

2.1.4色谱条件

Hydro-ＲP C18色谱柱(250 妹妹×4.6 妹妹，4μm);行动相0.4%甲酸乙腈(A)-0.2%甲酸水(B)，梯度洗脱(0～5 min，5%A;5～13 min，5～20%A;13～40 min，20～22%A;40～60 min，22～45%A;60～75 min，45～75 A%);柱温30℃;体积流量1.3 mL/min;进样量10μL。

2.1.5质谱条件

离子源ESI，扫描方式ESI+、ESI-模式;去世板气体温度320℃，体积流量10 L/min;鞘气温度350℃，体积流量12 L/min;破裂能量175 V;毛细管电压3 kV;正负离子网络畛域m/z 50～1 500。

2.2网络药理学钻研

2.2.1预料潜在靶点

将合成患上到的麝香通心滴丸入血成份经由PubChem数据库患上到其mol2名目文件，并将其上传至PharmMapper服务器(限度靶卵白为人类，其余为默认选项)，接管“药效团立室方式”患上到伪造筛选服从。将筛选出的份子-靶点立室度(Fit Score)大于即是3的药物靶点作为靶卵白，并经由UniProt数据库输入筛选患上到的卵白靶点PDBID，经检索以及转化操作患上到的麝香通心滴丸入血成份的潜在浸染靶点。经由GeneCards数据库，以“coronary atherosclerotic heart disease”为紧张词，检索与冠心病相干的基因，并与上述成份靶点立室妨碍合成，筛选与麝香通心滴丸入血成份相干的浸染靶点。

2.2.2卵白相互浸染网络构建与合成

String数据库是一种包罗已经知以及预料卵白质与卵白质相互浸染的数据库，将上述成份-疾病交加靶点导入String数据库，限度物种为人类(Homo sapiens)，最低相互浸染阀值设为低等置信度0.9“highest confidence”，同时呈现配置潜在游离点，而后下载PPI图形件并保存tsv文件，最后运用Ｒ语言对于患上到的PPI妨碍中间基因的筛选，其余参数连结默认配置。

2.2.3靶标GO富会集成以及KEGG通路富会集成

本钻研经由David 6.7数据库，对于成份-疾病交加靶点卵白妨碍GO富会集成、KEGG通路富会集成，其中GO富会集成包罗生物历程(biological process)、份子功能(molecularfunction)以及细胞组分(cellular component)3个全副，Select Identifier配置为Official GeneSymbol，List Type配置为Gene List，限度物种为人，并用FDＲ过错操作法对于P值作魔难校对于，最终以“P＜0.05”作为条件妨碍筛选，筛选出具备清晰差距的代谢通路。

2.2.4入血成份与中间靶点的份子对于接

对于上述麝香通心滴丸的入血成份与中间靶基因妨碍份子对于接，首先经由PubChem数据库患上到各份子的化学结构式。在PDB数据库检索靶基因卵白构象，并依据如下条件筛选:经由X晶体衍射法获取的卵白结构;卵白的晶体剖析度小于3;分型清晰的卵白。而后，运用AutoTools对于卵白妨碍加氢去除了水份子预解决，AutoGrid妨碍能量格点合计，AutodockVina妨碍小份子与卵白对于接，对于每一个对于接妨碍散漫能(affinity)评分，PyMoL作活性份子以及卵白的相互浸染图。

申明：本文所用图片、翰墨源头《中成药》2020年10月，版权归原作者所有。如波及作品内容、版权等成果，请与本网分割

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