基于血清药归天学的区别产地三棱药材 入血成份的含量测定（一）

指标:比照区别产地的基于三棱饮片入血成份对于香草酸、羟基苯甲酸、血清芦丁及阿魏酸含量的药归药材影响。方式:接管功能液相色谱法，天学对于3个区别产地的区地棱的含定三棱药材4种实用成份及其在血清中的含量妨碍审核。服从:因为各地种植的别产土壤、天气等差距，入血区别产地三棱药材4种成份体外以及入血含量各不相同;药材提取物中对于羟基苯甲酸、成份芦丁以安徽产地较高，量测香草酸以江苏产地略高;入血成份中对于羟基苯甲酸、基于芦丁以安徽产地较高，血清阿魏酸、药归药材香草酸以江苏产地略高，天学所有成份均在1 h左右达到峰值。区地棱的含定论断:入血成份含量测定对于三棱药材的别产产地分说具备未必的可行性，本钻研可为三棱的资源综合运用以及品质操作提供试验依据。

三棱指的是黑三棱科动物黑三棱的去世板块茎，其扩散畛域主要包罗长江中鄙俚流域，浙江、江苏、安徽等地。三棱味辛、苦，归脾经、肝经，性平，具备消积止痛以及破血行气等成果，主要用于癥瘕痞块，痛经，瘀血经闭，胸痹心痛，食积胀痛等。其主要成份为挥发油类、黄酮类、皂苷类、生物碱类、苯丙素类及有机酸类等。三棱具备扩血管、抗血栓组成、抗血小板群集、镇痛等浸染。此外，三棱对于人肺癌细胞及人乳腺癌细胞具备清晰的细胞毒理浸染，对于肝癌细胞株具备清晰的抑制作用。

本钻研旨在对于浙江、江苏、安徽三个产地三棱药材中的化学成份以及血中移行成份含量妨碍比照合成，为三棱的资源综合运用以及品质操作提供试验依据。

1试验资料

1.1药材

三棱药材购自浙江中医药大学中药饮片厂，浙江(批号:20171016)、江苏(批号:20170925)、安徽(批号:20170812)，与2015版《中国药典》一部的规定适宜合。

1.2试验动物

SD大鼠，SPF级，40只，♂，体品质(280±20)g，浙江中医药大学试验动物中间提供，动物答应证SCXK(沪)2013－0016。大鼠饲养情景:湿度40%～60%，温度25～27℃，食物充实，照明太甚，饮水从容。

1.3试验试剂

比力品及内标物均由中国食物药品检定钻研院提供，阿魏酸比力品(纯度:≥98%、批号:110773－20161)、对于羟基苯甲酸比力品(纯度:≥99%、批号:MKBK3576V)、芦丁比力品(纯度:≥98%、批号:Y23M7N11586)、香草酸比力品(纯度:98%、批号:110776－20150)、内标物核黄素(批号:JS0925ＲA14)。

1.4试验仪器

Agilent1200型功能液相色谱仪器:美国Agilnent;Agilnent Eclipse XDB－C18色谱柱(250 妹妹×4.6 妹妹，5μm);QL－861涡旋搅浑仪:海门市其林贝尔仪器制作;XS205DU详尽天平:METTLEＲTOLEDO公司;2－16PK离神思:德国Sigma公司;ND100－1氮气吹扫仪:杭州瑞诚仪器有限公司;SK5210HP超声波洗涤仪:上海科导超声仪器有限公司。

2试验方式

2.1区别产地三棱药材中化学成份合成

2.1.1溶液的配制

2.1.1.1比力品溶液的配制

详尽称取过多的对于香草酸比力品、羟基苯甲酸比力品、芦丁、阿魏酸比力品，消融于比例为1:1的甲醇水溶液，混标蕴藏液的比力品浓度为1 g/L，配好备用。

2.1.1.2供试品溶液的配制

分说收集浙江、江苏、安徽三个产地的三棱炮废品，取过多样品粉末及过多甲醇加热回流，放冷，甲醇补足失重，过膜即可。

2.1.2色谱条件

色谱柱:Agilent Eclipse XDB－C18(250 妹妹×4.6 妹妹，5μm);0.1%磷酸水溶液作为行动相A，甲醇为B，接管梯度挨次妨碍洗脱:0～5 min，20%B，5～20 min，20～48%B，20～40 min，48～90%B，40～50 min，90%B，50～51 min，90～20%B，51～60 min，20%B。254 nm的检测波长;1.00 mL/min的流速;柱温连结30℃;进样量均为10μL。

2.1.3方式学审核

2.1.3.1线性关连审核

将详尽称取的比力品溶液(0.12五、0.2五、0.五、1.2五、2.五、6.25 mL)分说置于25 mL的容量瓶中，加50%甲醇至刻度，分说用移液器详尽排汇10μL妨碍HPLC检测。按行动相色谱条件合成，测定各自峰面积，以横坐标(X)代表品质浓度，纵坐标(Y)代表峰面积，运用XY值绘制规范曲线。对于羟基苯甲酸的回归方程为Y=3.0722X－5.5952(Ｒ2=0.9997)，在品质浓度12.5～400 mg/L畛域内线性关连优异;香草酸的回归方程为Y=2.6874X－5.9319(Ｒ2=0.9991)，在品质浓度7.5～250 mg/L畛域内线性关连优异;阿魏酸的回归方程为Y=3.0578X－3.7665(Ｒ2=0.9995)，在品质浓度7.5～240 mg/L畛域内线性关连优异;芦丁的回归方程为Y=3.4586X－4.8854(Ｒ2=0.9998)，在品质浓度12.5～400 mg/L畛域内线性关连优异。

2.1.3.2详尽度试验

遵照色谱条件，取10μL对于立比力品溶液进样检测，陆续进样6次，以对于羟基苯甲酸、香草酸、阿魏酸、芦丁峰面积合计。服从ＲSD为0.24%、0.35%、1.05%、0.64%(n=6)，仪器详尽度呈现优异。

2.1.3.3晃动性试验

取三棱样品溶液10μL，遵照HPLC色谱条件，分说于二、四、八、十二、1六、24 h妨碍上样检测并记实峰面积。对于羟基苯甲酸、香草酸、阿魏酸、芦丁峰ＲSD分说为2.76%、2.48%、1.89%、1.68%(n=6)，服从呈现该样品溶液在24 h的晃动性优异。

2.1.3.4重复性试验

详尽称取6份三棱样品，每一份2 g，供试品溶液遵照规范制备后妨碍HPLC检测，记实峰面积。服从对于羟基苯甲酸、香草酸、阿魏酸、芦丁峰的ＲSD分说为1.68%、1.54%、2.45%、2.14%(n=6)。

2.1.3.5加样接管率试验

接管加样接管法，详尽称取已经知含量的三棱样品9份，退出对于羟基苯甲酸、香草酸、阿魏酸、芦丁规范品，供试品溶液遵照规范制备后妨碍HPLC检测，合计接管率，对于羟基苯甲酸的平均接管率为98.42%，ＲSD为1.79%(n=9);香草酸的平均接管率为97.35%，ＲSD为0.85%(n=9);阿魏酸平均接管率为99.12%，ＲSD为1.59%(n=9);芦丁平均接管率为100.56%，ＲSD为1.89%(n=9)。

2.1.4区别产地三棱药材含量测定

取3个产地的三棱样品，遵照规范制成供试品溶液。分说排汇供试品溶液10μL，妨碍HPLC检测，依据响应线性关连合计样品中对于羟基苯甲酸、香草酸、阿魏酸、芦丁含量，服从见表1。

2.2区别产地三棱入血成份钻研

2.2.1区别产地三棱药材提取

接管传统煎煮法，取3个产地三棱中药制成含生药2 g/mL的三棱水煎液原液。

2.2.2含药血清制备

取SD大鼠40只，♂，体品质(280±20)g，饲养1周。随机分4组，每一组10只，空缺比力组、浙江组、江苏组、安徽组。每一组分说给以响应的区别产地的三棱药材提取液，空缺比力组天天给以等量饮用水，逐日牢靠光阴灌胃。大鼠的老例给药剂量遵照(药液浓度2 g生药/mL，剂量2 mL/100 g)合计，灌胃1次/d，陆续灌胃7 d。最后一次给药前禁食12 h，末次给药结束后，分说于0.五、一、1.五、二、4 h妨碍大鼠眼眶静脉丛取血，3 000 r/m离心10 min，收集下层血清，56℃灭活30 min，掏出后无菌过滤，放入－20℃冰箱保存。每一组做混标，混分解2管血清组。

2.2.3比力品及内标的配制

详尽称取对于香草酸比力品、羟基苯甲酸比力品、芦丁及阿魏酸比力品过多，消融于甲醇水溶液(1∶1)，混标蕴藏液的比力品浓度为1 g/L，短缺混匀，超声30 min，用0.22μm微孔滤膜妨碍过滤，保存在4℃，检测前稀释成区别浓度。详尽称取内标物核黄素过多，消融于甲醇水溶液(1∶1)，配制内标物浓度为1 g/L的蕴藏液，涡旋短缺混匀，超声30 min，用0.22μm微孔滤膜妨碍过滤，保存在4℃。

2.2.4样本解决

300μL甲醇以及100μL内标溶液加到200μL血清样本中，运用涡旋仪妨碍震撼10 s，此时的溶液为乳红色悬浊液，12 000 r/min、4℃下离心12 min，卵白质为底部红色积淀。全副上清用移液枪吸出至离心管后妨碍氮吹，100μL甲醇水溶液(1∶1)复溶残渣，涡旋混匀，常温下12 000r/min离心10 min，取上清用于测定。

2.2.5色谱条件同2.1.2色谱条件。

申明：本文所用图片、翰墨源头《中国中医药科技》2020年7月第27卷第4期，版权归原作者所有。如波及作品内容、版权等成果，请与本网分割

相干链接：羟基苯甲酸，三棱，阿魏酸，芦丁