荷叶总黄酮提取工艺及其抗氧化性钻研（一）

荷叶属睡莲科动物莲的荷叶叶片，是总黄国家卫生部宣告的既是食物又是药品的动物。荷叶中富含多种具备生物活性的酮提成份，如荷叶精油、取工其抗荷叶生物碱、艺及氧化研荷叶多糖及荷叶黄酮等，性钻其中荷叶黄酮是荷叶其主要活性物资。报道呈现，总黄黄酮类化合物对于治疗血管病有很好的酮提成果，具备抗氧化、取工其抗晃动血管、艺及氧化研畅通血管、性钻防御高龄人的荷叶血压疾病等成果，对于身段代谢以及人体免疫也有紧张浸染。总黄以是酮提，针对于影响荷叶总黄酮提取的因素妨碍钻研，抉择优异的提取工艺，普及荷叶总黄酮的提取率，钻研其总黄酮抗氧化性，对于人体瘦弱呵护具备紧张意思。

1.试验全副

1.1试剂与仪器

荷叶样品，河北衡水湖；无水乙醇、氢氧化钠、硝酸铝、亚硝酸钠、硫酸亚铁、H2O二、水杨酸，均为合成纯；芦丁比力品，含量98.7%，化学规范品，上海金穗生物科技有限公司。722型可见分光光度计，上海仪电合成仪器有限公司；FA2004B型电子天平，上海衡平仪器仪表厂；FW100型高速万能破碎捣毁机，天津市泰斯特仪器有限公司；80-2型高速离神思，金坛市国旺试验仪器厂；BL6-180A型超声波洗涤机，上海碧浪仪器有限公司；SHB-Ⅲ型循环水式真空泵，郑州长盛试验仪器有限公司；GZH-DH-X型电热恒温去世板箱，郑州宏朗仪器配置装备部署有限公司。

1.2薄荷叶总黄酮提取的单因素试验

将风干的荷叶置于去世板的破碎捣毁机，破碎捣毁4min后，过60目分样筛，患上到所需荷叶样品，贮存于密封容器中，待用。

荷叶中总黄酮的提取流程：预解决后的荷叶粉→退出乙醇→超声提取→冷却至室温→离心→收集上清液→测吸光度→合计黄酮含量。

1.2.1料液比对于总黄酮提取率的影响

豫备75%乙醇溶液，电子天平称量1.00g解决备用的荷叶粉末，依据料液比1∶6，1∶8，1∶10，1∶12，1∶14分说搅浑，试验光阴25min，温度45℃，妨碍总黄酮提取。而后将患上到的提取液离心别离15min（转速5000r/min），并吞清液，用75%乙醇定容至25mL，取1mL清液妨碍黄酮含量测定。

1.2.2试验温度对于总黄酮提取率的影响

豫备75%乙醇溶液，用电子天平称量1.00g解决备用的荷叶粉末，依据料液比1∶10搅浑，试验光阴为25min，分说在温度为25℃、35℃、45℃、55℃以及65℃的试验条件下提取总黄酮。而后将患上到的提取液离心别离15min（转速为5000r/min），并吞清液，用75%乙醇定容至25mL，取1.00mL清液妨碍黄酮含量测定。

1.2.3区别乙醇浓度对于提取总黄酮提取率的影响

用电子天平称量1.00g解决备用的荷叶粉末，依据料液比1∶10，退出区别浓度（45%、55%、65%、75%、85%）的乙醇，试验光阴为25min，温度45℃，妨碍总黄酮提取。而后将患上到提取液离心别离15min（转速为5000r/min），并吞清液，用75%乙醇定容至25mL，取1.00mL清液妨碍黄酮含量测定。

1.2.4超声光阴对于总黄酮提取率的影响

豫备75%乙醇溶液，用电子天平称量1.00g解决备用的荷叶粉末，依据料液比1∶10搅浑，超声温度45℃，超声提取光阴分说为15min、30min、45min、60min、75min。而后将患上到提取液离心别离15min（转速为5000r/min），并吞清液，用75%乙醇定容至25mL，取1.00mL清液妨碍黄酮含量测定。

1.3正交试验

综合以上的单因素试验再次妨碍正交试验，以判断提取荷叶总黄酮的最佳试验妄想。正交因素水平表见表1。

1.4总黄酮含量测定

1.4.1规范曲线的绘制

将10mg芦丁溶于75%乙醇中，小幅度地摇晃，静置后运用蒸馏水定容至10mL，患上到浓度为1mg/mL的芦丁规范品溶液。取0.00mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL、1.20mL芦丁溶液放入20mL比色管中，量取1.0mL浓度为5%NaNO₂溶液，退出试管，摇匀后静置8min；量取1.0mL浓度为10%的Al（NO₃）₃溶液，退出比色管，轻晃后部署8min；量取10.0mL浓度为5%的氢氧化钠溶液，退出比色管；向比色管中退出75%的乙醇至20mL，轻晃，静置18min。510nm处测定各溶液的吸光度，做出芦丁规范曲线。

1.4.2黄酮含量的合计

精确量1.2所患上的清液1.0mL，按以上步骤在510nm的位置检测其吸光度值。遵照规范曲线，求出对于应的黄酮浓度，遵照公式合计黄酮含量。

黄酮含量（g/100g）=a×c×V/10W

（c，V，W为试验原始数据）

式中：a-稀释倍数；c-黄酮浓度，mg/mL；V-提取液总体积，mL；W-甘草粉品质，g。

1.5荷叶总黄酮的抗氧化性

1.5.1对于DPPH从容基的翦灭能耐

（1）配制所需浓度的DPPH溶液

用95%乙醇溶液对于0.0112g的DPPH妨碍消融；将上述溶液退出到50mL容量瓶中，退出95%乙醇溶液定容。

（2）测试DPPH从容基自身的吸光值Ac

取配好的DPPH溶液2.00mL于试管中；移取2.00mL的蒸馏水退出比色管，定容，轻晃，黯淡处静置18min；测定溶液在510nm位置的吸光值Ac。测试3次，取均值。

（3）测定退出黄酮后溶液的吸光值A_i

将区别浓度的样品溶液2.00mL用移液管移至试管中；取配好的DPPH溶液2.00mL，退出比色管，定容，轻晃，背光处部署18min；测定510nm处的吸光值A_i。重复妨碍3次，取平均值。

（4）测试黄酮自身的吸光值A_j

分说将区别浓度的样品溶液用移液管移取2.0mL至区别试管中；量取2.0mL蒸馏水放入比色管，定容，轻晃，黯淡处部署18min；测定510nm处的吸光值A_j。重复妨碍3次，取平均值。相同步骤测定相同浓度VC规范液的翦灭能耐为比力。

（5）合计DPPH·翦灭率：

1.5.2对于羟从容基（·OH）的翦灭浸染

1.5.2.1测试羟从容基自身的吸光值D

（1）量取2.00mL蒸馏水放入比色管。

（2）量取2.00mL浓度为6妹妹ol/L的FeSO₄溶液，退出比色管后摇匀，部署15min。

（3）量取2.00mL浓度为6妹妹ol/L的水杨酸，退出比色管后摇匀，部署15min。

（4）量取2.00mLH₂O₂溶液，退出比色管摇匀，部署15min。

（5）测出溶液在510nm下的吸光度值，记为D。

量取2.00mL蒸馏水放入比色管，测定将荷叶黄酮提取液退出到羟从容基后溶液的吸光值D_i，量取2.00mL浓度为6妹妹ol/L的FeSO₄溶液，退出比色管后摇匀，部署15min，量取2.00mL浓度为6妹妹ol/L的水杨酸，退出比色管后摇匀，部署15min，量取2.00mLH₂O₂溶液，退出比色管摇匀，部署15min，测出溶液在510nm下的吸光度值，记为D。

1.5.2.3测试区别浓度荷叶提取液自身的吸光值D_j

1.5.2.4相同步骤配制相同浓度的VC规范液为比力

1.5.2.5合计羟从容基的翦灭率

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